前列腺细胞培养的关键是改良培养液的成分，如加入激素样生长因子，可刺激前列腺细胞的生长，同时也能抑制成纤维细胞的生长。

【材料】

1．组织来源大鼠（10～20周龄）。

2．培养液WAJC 404，介质盐溶液（media salt solution,MSS )，胎牛血清。

3．试剂 I型胶原、霍乱毒素、地塞米松、上皮生长因子（EGF),鼠催乳激素、胰岛素、前列腺上皮细胞生长因子、青霉素、链霉素、卡那霉素等。

4．器皿手术刀、剪、镊子等，水浴箱、离心机、50ml锥形离心管，血细胞计数器，6cm培养皿、24孔培养板，毛吸管、移液器、吸头等。

【方法】

1．大鼠麻醉致死，全身浸泡于75％乙醇中消毒后，于无菌条件下切除所需大鼠前列腺叶，放入6cm平皿中。去除脂肪组织，称重。

2．用675 U/ml的胶原酶溶液2ml浸泡（溶剂为MSS液，配制时另加l001U/ml青霉素和l00ug/ml卡那霉素）。

3．剪碎标本，用毛吸管将剪碎的组织移至25cm²培养瓶内，添加胶原酶，达到1 ml/0.1g组织，在37℃水浴箱内振荡培养；1小时，800r/min离心5分钟，收集细胞。

4．用毛吸管将消化所得的上清液吸出，并用金属网（lmm）过滤，除去残渣。将细胞重新悬浮在5 ml含5％胎牛血清的MSS中，依次用253,150,100,41 um尼龙网过滤，每次过滤后都用5 ml含5％胎牛血清的MSS液冲洗筛网。离心收集细胞，重新悬浮于WAJC404培养基中，计数细胞，调整细胞密度至4x10⁶个／ml。

5．在24孔培养板的每1孔中接种50ul，约含细胞2x10⁵个，每孔加入WAJC404培养液1 ml，霍乱毒素10ng/ml，地塞米松1 uM ,EGF10ng/ml，催乳素1 ug/ml,胰岛素5ug/ml，前列腺上皮细胞生长因子10ng/ml，青霉素l001U/ml，卡那霉素100ug/ml。

6．将24孔培养板置37℃,5% C0₂孵箱内培养，分别于第3,5天时更换培养液，第7天细胞可长满孔底面。

【结果及鉴定】

1．培养至第7天可获得典型的单层贴壁生长的上皮细胞，可进行传代培养。

2．用细胞克隆培养法可从前列腺上皮细胞中分离出具有分泌功能的腺泡上皮细胞和无分泌功能的基底上皮细胞。腺泡上皮细胞高度分化，表达前列腺特异性抗原（PSA )、前列腺酸性磷酸酶、雄激素核受体（AR)、角蛋白8和18等；基底上皮细胞不表达PSA和AR，而表达P-cadherin, Bcl-2, C-met、角蛋白5和14等。