试管内培养的正常细胞或类正常细胞，经化学致癌物、放射线或病毒等作用，转化为恶性细胞或类恶性细胞来研究癌化现象的方法称转化（transformation）试验。此试验大致分为5类：I类是用二倍体成纤维细胞的定性试验。如仓鼠胎儿第2代细胞用致癌物质处理后，继续传代培养，观察其恶性化过程的方法。Ⅱ类是用二倍体细胞的定量试验。如仓鼠胎儿第2代细胞的克隆培养，从克隆的形态判断是否发生质转化，常用于对环境变异原的筛选。Ⅲ类是用异倍体成纤维细胞定量试验，如用异倍体细胞，即细胞株，多数是以接触抑制现象(contact inhibition）的丧失作为转化的指标，计数细胞重叠增殖的聚焦数进行量化检测，称为聚焦法。W类是用二倍体上皮细胞的定性试验。为上皮细胞的转化，主要用肝细胞，往往需长期培养才见转化，且具有接触抑制等指标不足的问题。V类是用器官培养法的定性试验。因器官培养期限可能较短，仅限于形态学变化，不至于出现恶性转化。以上方法各具优缺点，但必须重复性好。本法用BALB/3T3-A31-1-1细胞或C3H10Tl/2细胞经3-甲基胆蒽(3-methylcholanthrene, MCA）处理，约6周后形成转化细胞灶。此法应用广泛，而且作为WHO国际癌研究机关（IARC)指定的标准试验。

【材料】

1. A31-1-1细胞或C3H10T1/2细胞。

2. A31-1-1细胞用MEM+10% FBS培养基，C3H10T1/2细胞用BME+10% FBS培养基，3甲基胆蒽(MCA）以1 mg/ml的浓度，溶于二甲基亚砜( dimethyl sulfoxide, DMSO）中。

3．各种吸管，60mm塑料培养皿（42只），小试管数只，微量移液器20ul,200ul，细胞计数器。

4. Wright-Giemsa染液，实体显微镜。

【方法】

1．实验组及对照组所用60mm塑料培养皿的数量如表9-1。

2．制备细胞悬液，计数。按不同实验目的接种不同细胞数（表9-2)。

培养18～24小时后添加致癌物，阳性对照组不同细胞株的MCA用量和处理时间不同（表9-3)。每培养皿内添加MCA液20 u1；阴性对照组添加溶媒DMSO液20 u1（最终浓度0.5％以下）。由于DMSO可对细胞有直接伤害，将平皿斜放使培养基加深，将DMSO轻轻滴入平皿内。MCA处理24～72小时后换新鲜培养基。

3．转化实验用的培养皿经2周左右，形成密集的细胞单层，其后在每周换液1次，培养4～6周，用实体显微镜计数转化灶数，转化灶数根据其染色性、细胞排列和重叠生长等指标来判定（图9-1）。

4．克隆形成后培养皿不必换液，培养12～14天后，弃培养液，用生理盐水洗净，用甲醇固定后进行Giemsa染色，用实体显微镜计克隆数。

转化率的计算：①试验组内具转化灶的平皿数；②每平皿内形成转化灶数；③计数克隆形成率是计算接种细胞数与生存细胞数即相当于转化灶数的比例。