HPLC在手性药物拆分中的应用：

手性(chirality, handedness)一词源于希腊词“手”χειρ(cheir)，指左手与右手的差异特征。手性及手性物质只有两类：左手性和右手性。有时为了对比，另外加上一种无手性(no chirality)作参照，可称它为“中性手性”。左手性用learus或者L表示，右手性用dexter或者D表示，中性手性用M表示。所谓手性药物(chiral drug)，是指药物分子结构中引入手性中心后，得到的一对互为实物与镜像的对映异构体。这些对映异构体的理化性质基本相似，仅仅是旋光性特性有所差别，分别被命名为R-型(右旋)或S-型(左旋)和外消旋。

中国科学院“十一五”信息化建设专项的“手性药物、农药及其中间体拆分数据库”中，搜集了600多种商用手性药物，涵盖了528种全合成手性药物的大部分和一部分半合成手性药物，其中已拆分的药物400多种。数据库提供了详细的拆分方法和拆分条件，并配以结构式、分子式、分子量、结构谱图及药物主要作用，以及尽可能多的其他药物信息，可为药物手性分析研究及手性药品检测提供颇具价值的参考依据。特别重要的是，它为我们进一步建立手性药物、农药及其中间体拆分数据库打下了基础。

目前，许多有机药物的分子结构中有不对称碳原子，又称手性碳原子，这样的药物具有旋光性。立体构型不同的对映体，其药效、毒副作用也往往不相同。经常是一种对映体，具有强的生物活性和药效，而另一种却无药效，甚至有毒性的现象。但对映体在普通条件下的理化性质相同，故分离对映体比较困难，需要在手性拆分条件下进行。如大多数氨基酸都有右旋体和左旋体，但往往只能获得两者的混合物(消旋体)。又如，氯霉素(有2个手性碳)，只有D-(-)异构体有药效，而L-(+)异构体则完全无药效。

反应停(thalidomide，沙利度胺)事件：20世纪60年代前后，欧美至少15个国家的医生都在使用这种药治疗妇女妊娠反应，很多人吃了药后的确就不吐了，恶心的症状得到了明显的改善，于是它成了“孕妇的理想选择”(当时的广告用语)。于是，“反应停”被大量生产、销售，仅在联邦德国就有近100万人服用过“反应停”，“反应停”每月的销量达到了1吨的水平。在联邦德国的某些州，患者甚至不需要医生处方就能购买到“反应停”。但随即而来的是，许多出生的婴儿都是短肢畸形，形同海豹，被称为“海豹肢畸形”。1961年，这种症状终于被证实是孕妇服用“反应停”所导致的。于是，该药被禁用。然而，受其影响的婴儿已多达1.2万名。后来，人们才发现，有关药物机构并未仔细检验“反应停”可能会因为手性异构体未拆分，而产生严重的副作用，最终迫使“反应停”的销售者支付了赔偿。所以，1992年，美国FDA规定新药临床前研究必须要做手性异构体的拆分研究。因为，对映体中的左旋体(S)有致畸胎作用、右旋体CAN有镇静安眠作用；因此，采用HPLC对手性异构体的分离，在药物的制备和质量控制方面，具有重要的意义。

手性色谱法的优点：

①可以采用直接法，不需要作衍生化反应，直接利用手性色谱柱或手性流动相进行分离。

②也可以采用间接法，手性固定相引入不对称环境，使欲拆分的对映体(样品)、手性作用物(固定相)和手性源形成一个非对映异构分子的络合物。

近年来，采用HPLC对手性药物的拆分、定量分析的深入研究报道不断增多。

手性色谱常用的固定相有如下几种。

(DPirklle型手性固定相，由美国学者Pirklle主持研制。在分离的过程中，化合物与固定相h自荐发生π-π冗电荷转移相互作用，此类固定相为电荷转移型手性固定相。

②蛋白质类手性固定相。蛋白质是由手性亚基团氨基酸组成的大分子物质，将其中键合到硅胶上。

③多糖类手性固定相。如环糊精，可根据分子中葡萄糖单元的个数不同分为α、β、γ三类，分别由6、7、8个D-吡喃葡萄糖组成，将环糊精分别通过硅烷链连接在硅胶表面构成手性固定相。

④冠醚类手性固定相。

手性色谱常用的流动相有如下几种。

①配体交换型手性添加剂。由具有光学活性的氨基酸及其衍生物的手性配基和含二价金属离子螯合，分布于流动相中，遇到待分离的对映异构体时，即形成配合物，依据在固定相之间不同分配而实现分离。

②环糊精添加剂。

③手性离子对添加剂。如(+)10-樟脑磺酸、奎宁等。

HPLC在药品“打假”中的应用。

所谓假药就是：第一，药品所含成分与国家药品标准规定的成分不符的；第二，以非药品冒充药品或者以他种药品冒充此种药品的。凡是有下列情形之一的药品，就是假药。

①国务院药品监督管理部门规定禁止使用的药品；

②依照本法必须批准而未经批准生产、进口，或者依照本法必须检验而未经检验即销售的药品；

③变质的药品，

④被污染的药品；

⑤使用依照本法必须取得批准文号而未取得批准文号的原料药生产的药品；

⑥所标明的适应症或者功能主治超出规定范围的药品。

除假药外，还有劣药，即药品成分的含量不符合国家药品标准的药。凡是有下列情形之一者为劣药。

①未标明有效期或者更改有效期的；

②不注明或者更改生产批号的；

③超过有效期的；

④直接接触药品的包装材料和窗口未经批准的；

⑤擅自添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂及辅料的；

⑥其他不符合药品标准规定的。

假药、劣药是困扰全球药物发展的重要问题之一，已受到各国政府的重视。据估计，全球药品贸易中，大约有6％的药品为假冒产品。对假药、劣药的治理与打击，很大程度上依赖于分析检测方法的效果；而HPLC是最有效果的检测仪器之一。

还有，HPLC对违禁添加壮阳类药物的检测：

枸橼酸西地那非(sildenafil citrate)(俗称伟哥Viagra)是由美国辉瑞(Pfizer)制药公司研制生产的一种治疗心绞痛的药物，在临床试验中发现其对治疗阳痿有特殊的效果，这一意外发现使厂家将其以治疗阳痿的药物申报。美国FDA于1998年3月27日正式批准该药作为治疗阳痿的专用药物，并规定需在医生指导下使用。

许多补肾壮阳的中药以及中药保健品掺入了西地那非；中国食品药品检定研究院的张启民研究员曾经专门测定了22个厂家、10多种剂型的65批产品，发现其中13批非法掺入了枸橼酸西地那非。

不少补肾壮阳中药以及中药保健品掺入了他达拉非，因为它的疗效优于西地那非。但是，他达拉非的毒副作用大，容易引起头痛、消化不良、颜色分辨能力下降等，有可能导致心脑血管疾病患者突然死亡，故服用后果严重。

以上分析检测中基本上都使用HPLC、LC-MS、LC/LC/MS等仪器。

相关链接：HPLC的应用及其最新进展（一）