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高效液相色谱法/红外光谱法(HPLC/IR)

发布时间:2014-07-03 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:2887

高效液相色谱与傅里叶变换红外光谱(HPLC一FTIR)联用的主要困难是色谱流动相在红外区往往有强吸收,这就严重地影响色谱馏分的红外检测。迄今为止,能提供的商品接口尚停留在流动池上,其它形式的接口,虽有多种设想,但仍处于实验室阶段。

流动池接口的工作原理。流动池置于FTIR样品室内,它是一个具有进口及出口的可拆式或固定式微型液体池。HPLC流出液直接从下端进样管流入,然后从上端的出口管流出,并进行红外同步跟踪扫描和检测HPLC馏分。流动池的光程长度对联机检测很重要,它由色谱流动相对红外光的吸收情况所决定。为了保持足够高的红外透明度,以便在中红外区较宽的波长区域能观察溶质的吸收带,流动池的光程一般以O.1mm为宜,池体直径通常不超过4mm,因此流动池的有效容积小于2.5μl。常规HPlC柱(内径4.6mm)色谱峰的保留体积约为250μl,故用流动池作接口时,分离出的馏分实际有效用量仅为1%左右,因此HPlC一FTIR在溶剂红外透明度较高的光谱区里,检测限仍较GC一FTIR高两个数量级。在反相液相色谱中,流动相含水,流动池的光程应更短(<O.03mm),一般说来,它已不适合作为反相液相色谱的接口。

使流动池的体积与色谱峰体积相匹配的一个办法是采用高效微柱(内径<1mn),不但流动相用量少,而且在进样量相同的情况下,色谱峰浓度要比常规柱高得多。流动相用量少(整个色谱分离过程仅需l ml左右),意味着可采用价昂但能提供合适红外窗口的氘代试剂作流动相;峰浓度增加则表明可降低检测限。但对于红外吸收强烈的流动相,即使采用微柱,其检测限仍然较高。对于梯度洗脱,由于流动相组成在变化,这就使应用示差光谱程序以减免溶剂影响成为不太可能。总而言之.尽管流动池已作为HPLC一FTIR的定型接口,并具有简单、方便的优点,但存在较大的局限性。因此,在HPLC一FTIR联用技术研究中,许多工作又集中在测定红外光谱前,将溶剂除去以排除溶剂干涉的接口上。如热雾化技术、冷雾化技术、“过渡存贮”(buffer memory)技术等。这些探索在某些分析实例中取得了成功,并认为去除HPLC溶剂的方法比较好,但各种形式的接口尚不够完善,距实用化还有距离。

高效液相色谱与多个检测器联用

所有的色谱检测器,都可以看成是联用的器件;而所有的联用检测仪,又可认为实际上不过是在色谱仪后增加了一个检测器。

高效液相色谱仪还可以和多个检测器串联使用,这些仪器的技术设计和应用已有一定的报道。如HPLC—TR—MS,HPLC—NMR—MS等的串联使用。

近年来,随着微型柱(0.lmm—O.5mmid),微孔柱(O.5mm—lmmid)和毛细管液相色谱柱(0.05nm~0.1mmd)的发展,促进了液相色谱小型化。人们实现了将GC的通用检测器FID以及其他一些检测器(TID、NPD、FPD、PID、ECD、TEA)与HPLC在线连接。

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