王金黄学名碱性橙Ⅱ( Basic Orange Ⅱ)，是一种偶氮类碱性染料，相对分子质量248.72，闪光棕红色结晶块或砂状。红褐色结晶性粉末或带绿色光泽的黑色块状晶体。溶于水呈带黄的橙色，溶于乙醇和溶纤素，微溶于丙酮，不溶于苯。为致癌物，主要用于纺织品、皮革制品及木制品的染色。根据美国卫生研究所(NIH)化学品健康与安全数据库资料表明：过量摄取、吸入以及皮肤接触该物质均会造成急性和慢性的中毒伤害。由于碱性橙Ⅱ比其他水溶性染料如柠檬黄、日落黄等更易于在豆腐以及鲜海鱼上染色且不易褪色，因此一些不法商贩用碱性橙Ⅱ对豆腐皮、黄鱼进行染色，以次充好，以假乱真，欺骗消费者。

食品中王金黄的测定方法有：气-质联用法、高效液相色谱法和反相高效液相色谱法等。本文采用液相色谱法检测食品中的王金黄。

(一)实验原理

试样中的目标化合物用乙腈：水(7:3)提取，用高效液相色谱C₁₈ 柱分离，紫外检测器检测，外标法定量。

(二)试剂及仪器

1．试剂

(1)乙酸铵、无水乙酸为分析纯，甲醇、乙腈为色谱纯，试验用水均为超纯水。

(2)标准储备液的配制准确称取0.0100 g酸性黄、酸性橙Ⅱ、碱性橙、碱性玫瑰精标准品于10mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容。

(3)标准使用液分别吸取1.0mL酸性黄、酸性橙Ⅱ、碱性橙、碱性玫瑰精的标准储备液到10mL容量瓶中用水定容至刻度为中间使用液，再分别取0.1、0.5、1.0、2.0、5.0mL中间使用液到1mL容量瓶中用水定容至刻度，四种组分的标准系列为：1、5、10、20、50ug/mL。

(4)提取液乙腈：水=7:3。

2．仪器

高效液相色谱仪，配备有Waters-Allains2695泵控及自动进样系统；Waters-2996二极管阵列检测器；离心机；超声振荡器。

(三)实验步骤

1．样品处理

准确称取2～5g样品于50 mL塑料离心管中，加入10 mL提取液，超声提取20min后，以1000r/min离心10min，取20uL液相色谱测定。

2．液相色谱参考条件

色谱柱：Inertsil ODS-34.6mm×250mm, 5um；流动相：A：乙腈；B：10mmol/L乙酸铵水溶液(乙酸0.12%)；梯度洗脱(如表6-3所示)；波长：酸性黄、酸性橙Ⅱ、碱性橙，450nm；碱性玫瑰精，550nm；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；进样体积：20uL。

分别取标准和样品各20 uL进样，HPLC测定，外标法定量。

表6-3梯度洗脱条件

3．结果计算

按式(6-2)计算王金黄含量

X＝ρ×10/m     (6-2)

式中X—样品中待测组分的含量，ug/g;

p—样品中待测组分的测定浓度，ug/mL;

m—样品重量，g。

相关链接：苏丹红的测定

文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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