碱性嫩黄(Auramine O)，旧称盐基淡黄O或盐基槐黄，又称奥拉明O。黄色粉末，工业染料，一般只能用于染布。主要用于醋纤、棉织品的染色，还用于纸张、皮革、油漆等的着色。难溶于冷水和乙醚，易溶于热水和乙醇。相对分子质量303.84。由于能起染色作用，一些不法商贩把碱性嫩黄加入到腐竹中。碱性嫩黄对皮肤黏膜有轻度刺激，可引起结膜炎、皮炎和上呼吸道刺激症状，人接触或者吸入碱性嫩黄都会引起中毒。颜色过于黄的腐竹可能加入了碱性嫩黄。

碱性嫩黄的检测方法为高效液相色谱法。

(一)实验原理

样品用乙腈提取后用正己烷脱脂净化，然后在碱性条件下用乙醚萃取，最后溶于甲醇中进行HPLC分离、检测。

(二)试剂和仪器

1．试剂

(1)甲醇、醋酸铵、冰醋酸、氨水、CH₂C1₂、十二烷基磺酸钠为分析纯，实验用水为去离子水，碱性嫩黄O(pure, Acros)。

(2)称取碱性嫩黄00.01g，用甲醇溶解并定容于100mL容量瓶，配制成100ug/mL标准储备液，使用时逐级稀释成标准工作溶液(0.1～50ug/mL)。将V_冰醋酸:V_甲醇＝1:3的比例配制提取液。

2．仪器

高效液相色谱系统：WatersS10泵配，Waters486紫外可见检测器,UN-3100紫外分光光度计(Hitachi)，KQ-500DB型数控超声波清洗器。

(三)实验步骤

1. 样品处理

样品粉碎均匀后称取2.5g样品于烧杯中，加入提取液20mL，超声提取30min，过滤，再分别用20mL,10mL甲醇提取两次，过滤，合并滤液，氨水调节滤液至弱碱性。将滤液转移至分液漏斗，向其中加入20mL去离子水、20mL CH₂C1₂，振摇、静置、分层，收集下层溶液，再分别用20mL和10mL CH₂C1₂萃取两次。合并3次萃取液，浓缩至近干，定容至2.5 mL，用0.45 um尼龙滤膜过滤，待测。

2．液相色谱参考条件

色谱柱为Sytmmtryshield^TM RP18(4.6mm×250mm,5um)，柱温35℃，检测波长430nm,流动相A：甲醇，经0.50um有机相滤膜抽滤；流动相B; 0.1 mol/L醋酸铵、0.002 mol/L十二烷基磺酸钠，用醋酸调节pH至4.5，经0.45 um水相滤膜抽滤。流动相A和流动相B按6:4的比例以1.0mL/mm流速进行。选择430nm作为检测波长。流动相选择V_甲醇：V_水=6:4,pH为4.5, 20%醋酸的甲醇作为提取液。

3．标准曲线的绘制

将浓度为0.5、1、10、20、50ug/mL的碱性嫩黄O标准溶液依次进样，以色谱峰面积对浓度作图，得到工作曲线。

4. 样品测定

将处理得到的待测样品过高效液相色谱，以得到的色谱峰面积在工作曲线上查得浓度。

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文章来源：《食品质量与安全检测技术》

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