一、概述

(一)理化性质

展青霉素(PAT)又称为棒曲霉素，分子式C₇H₆O₄，相对分子质量154.12，为无色菱形结晶，熔点为110～112℃，在70～100℃时可升华。结构式如下：

展青霉素溶于水、三氯甲烷、丙酮、乙醇、乙酸乙酯等溶剂，微溶于乙醚和苯，不溶于石油醚。酸性条件下稳定，在碱性溶液中活性降低，易与含巯基(-SH)化合物反应。

(二)主要来源

展青霉素主要由曲霉、青霉和雪白丝表霉等真菌产生，是一种水果污染物，在多种水果、水果制品和果酒中都有发现，最常见于苹果及其制品中，如苹果汁、苹果酒、蜜饯。

(三)毒性与危害

展青霉素是一种神经毒素，可引起急性、亚急性毒性。中毒后会出现抽搐、呼吸困难、肺淤血、水肿、溃疡和出血，体重减轻、胃肠道反应、肾功能改变等症状。还可以引起染色体畸变、基因突变，改变免疫系统应答，抑制免疫细胞功能，具有胚胎毒性，可致畸。

(四)分析方法

展青霉素测定方法有薄层色谱法(GBIT 5009.185)、高效液相色谱法和液相色谱-质谱/质谱法(NY/T 1650，SNIT 2534)。

二、薄层色谱法

1．原理样品用乙酸乙酯提取、稀碳酸钠溶液净化后，经硅胶薄层板展开分离，薄层扫描仪紫外反射光扫描测定法检测，与标准比较定量。

2．分析步骤

(1)样品处理：果汁、果酒直接用乙酸乙酯振摇提取，果酱加适量无水硫酸钠研磨脱水后，再用乙酸乙酯提取。乙酸乙酯层用1.5%碳酸钠溶液振摇，除杂质后，在水浴上真空减压浓缩近干，用少许三氯甲烷定容，供薄层色谱分析用。

(2)测定：在硅胶GF₂₅₄薄层板上，点3个点：标准点、样品点和位置参考点，标准点和样品点在基线位置，位置参考点在样品点垂直线距顶端2cm处。先用三氯甲烷-丙酮(30+1.5)横展剂横向展开至顶端，取出挥干，再用甲苯-乙酸乙酯-甲酸(50+15+1)纵向展开至顶端，挥干溶剂。254nm紫外光照射，标准点位置显示黑色斑点。若样品点位置也出现黑色斑点，则样品可能含展青霉素，需进一步确证。

(3)确证实验：将可疑阳性样品的薄层板喷以3-甲基-2-苯并噻唑酮腙水合盐酸盐(MBTH-HC1·H₂O)溶液，130℃烘烤15分钟，冷却至室温，于波长365nm紫外灯下观察，展青霉素应呈橙黄色斑点。经确证实验为阳性的样品需要根据样品点黑色斑点的强度大小进行稀释，使测定值在仪器线性范围内。以样品点展青霉素峰面积与标准点的进行比较，定量。

3. 方法说明本方法适合于苹果、山楂制品中展青霉素的测定；在紫外灯照射下，硅胶GF₂₅₄薄层板背景显黄绿色荧光，有展青霉素的位置因为背景荧光碎灭而显黑色斑点。

三、高效液相色谱法

1．原理样品经乙腈提取，多功能净化柱净化，高效液相色谱分离，紫外检测器或二极管阵列检测器检测，标准曲线法定量。

2．分析步骤

(1)样品处理：澄清的果汁用乙腈提取后，离心，上清液过多功能净化柱，控制流速为1ml/min。取净化液在40℃水浴上氮吹浓缩至干，残渣用pH 4.0水溶液溶解，0.45um滤膜过滤，供检测。果酱、浊汁、山楂片等需先用果胶酶酶解过夜，再用乙酸乙酯提取，提取液浓缩后，残渣用1％乙酸溶解，并用适量乙腈混匀后再净化处理。

(2）测定：色谱参考条件为C₁₈色谱柱(250mm×4.6mm, 5um)；柱温30℃；流动相为甲醇-水(10+90)，流速1 ml/min；检测波长276nm。

3．方法说明本方法适用苹果清汁、浊汁、番茄酱、山楂片中展青霉素的测定，方法检出限为5ug/kg。

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文章来源：《食品理化检验》

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