1 范围

本标准规定了牛甲状腺和牛肉中硫脲嘧啶(2-thiouracil )、甲基硫脲嘧啶(methyl thiouracil)、正丙基硫脲嘧啶(propyl thiouracil)、它巴唑(tapazole) ,琉基苯并咪唑(2-mercaptobenzimidazole)残留量液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于牛甲状腺和牛肉中硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶、正丙基硫脲嘧啶、它巴唑、琉基苯并咪唑残留量的测定。

本标准方法的检出限：牛甲状腺和牛肉中硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶、正丙基硫脲嘧啶、它巴唑、琉基苯并咪唑均为2 ug/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004，ISO 5725-1：1994，IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-1992,neq ISO 3696:1987)

3 原理

试样中残留的硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶、正丙基硫脲嘧啶、它巴唑、琉基苯并咪唑用乙酸乙酯提取，氨基固相萃取柱净化后浓缩，用4-氯-7-苯并呋咱衍生化，再用固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱检测。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 甲醇：色谱纯。

4.2 乙腈：色谱纯。

4.3 乙酸乙酯：色谱纯。

4.4 磷酸氢二钠，Na₂HPO₄·12H₂O。

4.5 磷酸二氢钾，KH₂PO₄。

4.6 乙酸。

4.7 浓盐酸。

4.8 氢氧化钠。

4.9 三氯甲烷。

4.10 正己烷。

4.114-氯-7-苯并呋咱(4-chloro-7-nitrobenzo-2-f urazan NBF-Cl),C6H2CIN3O3：含量≥99％。

4.12 琉基乙醇：分析纯。

4.13 乙二胺四乙酸二钠，C₁₀H₁₄N₂O₈Na₂·2H₂O。

4.14 无水硫酸钠：使用前650℃灼烧4 h。

4.15 磷酸盐缓冲溶液：pH=8,0.2 mol/L。称取67.7g磷酸氢二钠(4.4)和1.5 g磷酸二氢钾(4.5),用水溶解，定容至1000 mL。

4.16 盐酸溶液：0.2 mol L。量取17 mL浓盐酸(4.7)，用水定容至1000 mL。

4.17 氢氧化钠溶液：1 mol L：称取40g氢氧化钠(4.8)，用水溶解，定容至1000 mL。

4.18 衍生剂:5 mg mL：称取0.05g 4-氯-7-苯并呋咱(NBF-Cl)(4.11)溶于10 mL甲醇(4.1)，现用现配。

4.19 乙二胺四乙酸二钠溶液：0.1 mol/L。称37.2 g乙二胺四乙酸二钠(4.13)溶于1000 mL水中。

4.20 洗脱液：含3％乙酸的甲醇和三氯甲烷(15+85)混合溶液。吸取3 mL乙酸(4.6)于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀。吸取该溶液15 mL于100 mL容量瓶中，用三氯甲烷(4.9)定容至刻度，混匀。

4.21 定容液：含0.3％乙酸的乙腈水溶液。吸取0.3 mL乙酸和15 mL乙腈(4.2)于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。

4.22 标准物质：硫脲嘧啶(2-thiouracil, TU)、甲基硫脲嘧啶(Methyl thiouracil, MTU)、正丙基硫脲嘧啶(propylthiouracil, PrTU)、它巴唑(Tapazole, TAP),琉基苯并咪唑(2-mercaptobenzimidazole, MBI),纯度≥99％。

4.23 内标标准物质：甲基琉基苯并咪唑(2-methoxethox-mercaptobenzimidazole, MEMBI )，纯度≥99％。

4.24 标准储备溶液：1.0 mg/mL。称取适量的硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶、正丙基硫脲嘧啶、它巴唑、琉基苯并咪唑标准物质(4.22)，分别用甲醇配成1.0 mg/mL的标准储备液。避光-18℃保存，可使用6个月。

4.25 混合标准工作溶液：0.1 ug/mL。吸取每种适量标准储备溶液(4.24)，用甲醇稀释成0.1 ug/mL的混合标准工作溶液，避光-18℃保存，可使用3个月。

4.26 内标标准储备溶液：1.0 mg/mL。称取适量的甲基琉基苯并咪唑标准物质(4.23)，用甲醇配成1.0 mg/mL的标准储备液，避光-18℃保存，可使用6个月。

4.27 内标标准工作溶液：0.1 ug/mL。吸取内标标准储备溶液(4.26)，用甲醇稀释成0.1ug/mL的内标标准工作溶液，避光-18℃保存，可使用3个月。

4.28 Sep-Park Amino Propyl固相萃取柱或相当者：500 mg, 3 mL。使用前用20 mL正己烷预处理，保持柱体湿润。

4.29 Oasis HLB固相萃取柱或相当者：60 mg, 3 mL。使用前分别用5 mL甲醇和10 mL水预处理，保持柱体湿润。

4.30 0.2 um滤膜。

文章来源：《化学试剂标准汇编》

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