7 测定步骤

7.1 提取

称取5g试样(精确到0.01g)置于50 mL具塞玻璃离心管中，加入0.5 ug/mL内标甲基强的松龙(6-alpha-methylprednisolone)标准工作溶液20 uL，加入10 mL 0.3 mol/L氢氧化钠溶液，在液体混匀器上混匀1 min，加26 mL乙酸乙酯，用均质器均质1 min，在振荡器振荡20 min，以3000 r/min离心5 min，取上清液过盛有25 g无水硫酸钠的筒形漏斗至梨形瓶中。再用20 mL乙酸乙酯提取一次，过无水硫酸钠筒形漏斗，合并上清液，用旋转蒸发器于45℃水浴上减压蒸发至近干，用1 mL乙酸乙酯和5 mL正己烷溶解。

7.2 净化

将提取液移至经预处理的BOND-ELUT Si固相萃取柱中，用2 mL丙酮＋正己烷(4+6)洗涤梨形瓶和萃取柱，弃去全部流出液。在65 kPa的负压下，减压抽干1 min，用6 mL丙酮＋正己烷(4+6)以≤3 mL/min流速洗脱，收集洗脱液于10 mL样品管中，用氮气浓缩仪吹干，用1 mL流动相溶解，过0.20 um滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.3 测定

7.3.1 液相色谱条件

a)色谱柱：Atlantis dC₁₈, 3 um,150 mm×2.1 mm(内径)或相当产；

b)流动相：乙腈+0.1％甲酸水(50+50)；

c)流速：200 uL/min;

d)柱温：30℃；

e)进样量：20uL。

7.3.2 质谱条件

a)离子源：大气压化学电离源(APCI);

b)扫描方式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应监测；

d)雾化电流：3.00 uA;

e)气帘气压力：0.138 MPa;

f)雾化气压力：0.276 MPa;

g)辅助加热气压力：0.138 MPa;

h)离子源温度：250℃；

i)定性离子对，定量离子对，去簇电压和碰撞能量见表1。

表1 地塞米松和甲基强的松龙的质谱参数

7.3.3 液相色谱-串联质谱测定

在仪器最佳工作条件下，采用内标法进行定量测定，内标为甲基强的松龙，为减少基质的影响，定量采用基质标准工作溶液进样，样品溶液中地塞米松的响应值应在仪器测定的线性范围内。地塞米松和甲基强的松龙标准物质总离子流图参见图A.1。在上述色谱条件和质谱条件下，地塞米松和甲基强的松龙参考保留时间见表2。

表2 地塞米松和甲基强的松龙的参考保留时间

7.4 平行试验

按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。

7.5 空白试验

除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。

8 结果计算

测定结果可由计算机按内标法自动计算，也可按式(1)计算：

式中：

X—试样中被测物残留量，单位为微克每千克(ug/kg);

c_s—基质标准工作溶液中被测物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);

A—试样溶液中被测物的色谱峰面积；

A_s—基质标准工作溶液中被测物的色谱峰面积；

c_i—试样溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

C_si—基质标准工作溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

A_si—基质标准工作溶液中内标物的色谱峰面积；

A_i—试样溶液中内标物的色谱峰面积；

V—样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；

m—试样溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。

注：计算结果应扣除空白值。

9 精密度

本标准的精密度数据是按照GB/T 6379.1和GB/T 6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值以95％的可信度来计算。

9.1 重复性

在重复性测定条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，动物组织中地塞米松含量范围及重复性方程见表3。

表3 含量范围及重复性和再现性方程

如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。

9.2 再现性

在再现性测定条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，动物组织中地塞米松的含量范围及再现性方程见表3。

相关链接：液相色谱-串联质谱法测定畜禽肉中地塞米松残留量（一）

文章来源：《化学试剂标准汇编》

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