5 仪器

5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

5.2 固相萃取装置。

5.3 氮气浓缩仪。

5.4 液体混匀器。

5.5 分析天平：感量0.1 mg和0.01g。

5.6 真空泵。

5.7 均质器。

5.8 移液器：10 uL～100 uL和100 uL～1000 uL。

5.9 聚丙烯离心管：50 mL，具塞。

5.10 pH计：测量精度±0.02 pH单位。

5.11 低温离心机：可制冷到4℃。

5.12 玻璃离心管：15mL。

6 试样制备与保存

6.1 试样的制备

将牛、猪肝脏和肌肉组织样品充分搅碎，均质，分出0.5kg作为试样，置于清洁样品容器中，密封，并做上标记。

6.2 试样的保存

将制备好的试样于-18℃以下保存。

7 测定步骤

7.1 卡巴氧的前处理步骤

7.1.1 称取5g试样，精确至0.01 g。置于50 mL聚丙烯离心管中，加入5g中性氧化铝(4.10)。

7.1.2 加入25 mL乙腈＋乙酸乙酯溶液(4.11)，于液体混匀器上充分混合5 min，以5000r/min离心5 min，将上清液移取至另一干净的50 mL离心管，加入10 mL正己烷(4.4)到管内，振荡2 min，以5 000 r/min离心5 min，弃去上层正己烷，将下层清液转移至150 mL鸡心瓶中。

7.1.3 重复7.1.2步骤一次，合并两次提取液于同一鸡心瓶中，加入一定量的喹噁啉-2-羧酸-d4 标准溶液(4.29)，使其浓度为2.0 ng/g,40℃水浴，减压旋转蒸发至干。

7.1.4 准确加入1.0 mL甲酸+甲醇溶液(4.15)溶解残渣，过0.2 um滤膜后，供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.2 脱氧卡巴氧、喹噁啉-2-羧酸、3-甲基喹噁啉-2-羧酸的前处理步骤

7.2.1 称取5g试样，精确至0.01g。置于50 mL聚丙烯离心管中，加入10 mL 0.6％甲酸溶液(4.13),混匀后，置于(47±3)℃振荡水浴中振摇1h；先加入3 mL 1.0 mol/L Tris溶液(4.25)混匀，再加入0.3 mL蛋白酶水溶液(4.19)，充分混匀后，置于(47±3)℃振荡水浴中酶解16 h～18 h。加入20 mL 0.3 mol/L盐酸溶液(4.17)，振荡5 min，在10℃以5000r/min离心15 min，上清液过滤。

7.2.2 将滤液(7.2.1)移入Oasis MAX固相萃取柱(4.30)中，待样液全部流出后，用30 mL乙酸钠＋甲醇溶液(4.22)淋洗固相萃取柱，真空抽于15 min。

7.2.3 在一支干净的玻璃管内加入一定量的喹噁啉-2-羧酸-d4标准溶液(4.29)，使其浓度为2.0 ng/g，再用4×3 mL二氯甲烷将脱氧卡巴氧洗脱至管内，在45℃用氮气浓缩仪吹干。

7.2.4 固相萃取柱再用3×3 mL甲醇,3 mL水、3×3 mL 0.1 mol/L盐酸溶液(4.16)和2×3 mL甲醇＋水溶液(4.23)分别淋洗，真空抽干15 min，然后用2 mL乙酸乙酯再淋洗固相萃取柱，弃去全部淋出液，最后用3 mL甲酸乙酸乙酯溶液(4.12)洗脱喹噁啉-2-羧酸和3-甲基喹噁啉-2-羧酸到7.2.3所用试管中，在45℃用氮气浓缩仪吹干。准确加入1.0 mL 0.1％甲酸＋甲醇溶液、(4.15)溶解残渣，过0.2 um滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.3 色谱测定

7.3.1 液相色谱条件

a)色谱柱：Inertsil ODS-3,3 um, 100 mm×2.1 mm(内径)或相当者；

b)流动柏：甲醇、乙腈以及0.1％甲酸溶液，梯度洗脱条件见表1；

c)流速：0.2 mL/min;

d)柱温：30℃；

e)进样量：30 uL。

表1 梯度洗脱条件

7.3.2 质谱条件

a)离子源：电喷雾离子源；

b)扫描方式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应监测；

d)分辨率：单位分辨率；

e)电喷雾电压：5000 V ;

f)雾化气流速：8.0 L/min;

g)气帘气流速：7.0 L/min;

h)辅助气流速：5.0 L/min;

i)离子源温度：450℃；

i)定性离子对、定量离子对及其他质谱参数见表2。

表2 各种化合物的定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞电压、碰撞池出口电压

相关链接：液相色谱-串联质谱法测定牛、猪肝脏和肌肉中卡巴氧、喹乙醇及代谢物残留量（一）

文章来源：《化学试剂标准汇编》

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