7.2 试样溶液的制备

将冷冻尿液样品融化混匀，取部分样品以转速4000r/min离心10 min。然后，量取5 mL(精确到0.01mL)于15 mL具塞离心管中。按7.1.2和7.1.3操作。

7.3 空白基质溶液的制备

将阴性冷冻尿液样品融化混匀，取部分样品以转速4000r/min离心10 min。然后，量取5 mL(精确到0.01mL)于15 mL具塞离心管中。按7.1.2和7.1.3操作。

7.4 测定

7.4.1 液相色谱条件

a) 色谱柱：Inertsil C₁₈,5 um, 150 mm×2.1 mm(内径)或相当者；

b) 流动相：0.1％乙酸水溶液＋乙腈(62+38);

c) 流速：0.3 mL/min;

d) 色谱柱温度：35℃；

e) 进样量：20uL。

7.4.2 质谱条件

a) 离子源：ESI，正模式；

b) 雾化喷嘴压力：0.24 MPa;

c) 干燥气流量：9.0 L/min;

d) 干燥气温度：350℃；

e) 毛细管电压、去簇电压、碰撞电压等电压值应优化至最优灵敏度；

f) 检测离子对见表1。

表1 四种被测物的保留时间、母离子和子离子

7.4.3 液相色谱-串联质谱测定

7.4.3.1 定性测定

每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与基质混合标准校准溶液中对应的保留时间偏差在±2.5％之内；且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的基质混合标准校准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表2规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。

表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许误差

7.4.3.2 定量测定

在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准校准溶液进样，以峰面积为纵坐标，基质混合校准溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。

7.5 平行试验

按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。

7.6 回收率试验

吸取适量混合标准工作溶液，用空白基质溶液(7.3)稀释成所需浓度的标准校准溶液。阴性样品中添加标准溶液，按7.2操作，测定后计算样品添加的回收率。

8 结果计算

试样中被测组分残留量利用数据处理系统计算或按式(1)计算：

式中：

x—试样中被测组分残留量，单位为微克每升(ug/L) ;

c—从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

V₁—样品溶液最终定容体积，单位为毫升(mL);

V₂—样品溶液所代表最终试样的体积，单位为毫升(mL)。

9 精密度

本标准的精密度数据是按照GB/T 6379.1和GB/T 6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值以95％的可信度来计算。

9.1 重复性

在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，被测物的含量范围及重复性方程见表3。
如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。

9.2 再现性

在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，被测物的含量范围及再现性方程见表3。

表3 四种分析物的含量范围及重复性和再现性方程

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文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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