1 范围

本标准规定了牛尿中玉米赤霉醇、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚残留量液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于牛尿中玉米赤霉醇、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚残留量的侧定。

本标准的方法检出限：玉米赤霉醇和己烷雌酚为0.5 ug/L，己烯雌酚和双烯雌酚为1.0 ug/L。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1:1994,IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-1992,neq ISO 3696:1987)

3 原理

免疫亲和柱内含有的特异性抗体选择性地与试样中己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚和玉米赤霉醇结合，形成抗体-抗原复合体，用水淋洗柱除去杂质，用洗脱剂洗脱吸附在柱上的目标物，收集洗脱液。试液用液相色谱-串联质谱仪测定，保留时间和离子丰度比定性，内标法定量。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 甲醇：色谱纯。

4.2 乙醇：色谱纯。

4.3 乙腈：色谱纯。

4.4 淋洗液：将Randox试剂盒中提供的淋洗原液用去离子水按1:20稀释。

4.5 洗脱液：乙醇＋水(70+30)。量取70 mL乙醇(4.2)与30 mL去离子水混合。

4.6 储备液：将Randox试剂盒中提供的储备原液用去离子水按1:5稀释。

4.7 免疫亲和层析柱：Randox或相当者。

4.7.1 玉米赤霉醇免疫亲和层析柱：亲和柱的最大容量为100 ng玉米赤霉醇。

4.7.2 二苯乙烯免疫亲和层析柱：亲和柱的最大容量为50 ng己烯雌酚,50 ng己烷雌酚，50 ng双烯雌酚。

4.8 激素标准物质：玉米赤霉醇(包括a-玉米赤霉醇和各玉米赤霉醇，各50％)，纯度≥97%；己烯雌酚，纯度≥99％；己烷雌酚，纯度≥98％；双烯雌酚，纯度≥98％。

4.9 激素标准溶液：分别准确称取适量的玉米赤霉醇、己烯雌酚、己烷雌酚和双烯雌酚标准物质，用甲醇(4.1)配制成1.0 mg/mL标准储备溶液。再根据需要以甲醇配制成不同浓度的混合标准溶液作为标准工作溶液，保存于4℃冰箱中，可使用三个月。

4.10 内标标准物质：玉米赤霉醇-4氟代(包括a-玉米赤霉醇-4氘代和各玉米赤霉醇-4氘代，各50％)，纯度≥99％；己烯雌酚-8氘，纯度≥98％。

4.11 内标标准溶液：准确称取适量玉米赤霉醇-4氘和己烯雌酚-8氘代标准物质，用甲醇分别配制成1.0 mg/mL标准储备溶液。再以甲醇稀释成适用浓度的混合内标标准工作溶液，保存于4℃冰箱中，可使用三个月。

4.12 滤膜：孔径0.45 um。

5 仪器

5.1 液相色谱-串联质谱联用仪：配有大气压化学电离源：

5.2 离心机：转速大于3000r/min。

5.3 氮气浓缩仪。

5.4 涡旋振荡器：

6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

取有代表性样品．制成实验室样品。试样分为两份，置于样品瓶中，密封，并做上标记。

6.2试样保存

将试样置于2℃～8℃下保存。

相关链接：牛猪肝肾和肌肉组织中玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚残留量的测定（三）

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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