7 测定步骤

7.1 提取

准确称取2g样品(准确至0.01g)至50 mL离心管中，加入10 mL乙酸乙酯，匀浆机上8000r/min均质30s,4000r/min离心5 min，上清液转移至25 mL比色管中；另取-50 mL离心管加入10 mL乙酸乙酯，洗涤匀浆刀头10 s，洗涤液移入前一离心管中，用玻棒捣碎离心管中的沉淀，液体混合器上涡旋混合2 min , 4.000r/min离心5 min，上清液合并至25 mL比色管，用乙酸乙酯定容至25.0mL，摇匀备用。

7.2 净化

准确移取2.50 mL样品提取液至蒸发瓶中，在40℃下旋转蒸发至干，用2 mL甲醇溶解，液体混匀器上混旋2 min，置超声波水浴中超声5 min，该样液全部转移至碱性氧化铝净化柱(4.6)上，控制流速在1 mL/min～2mL/min，用2 mL甲醇淋洗净化柱，收集全部流出液并定量转移至浓缩瓶中，40℃下真空旋转蒸发至干，用1.00 mL乙腈溶解残渣，并置超声波水浴中超声振荡1 min．加入1.00 mL水，置超声波水浴中超声振荡1min, 0.2 um滤膜(4.11)过滤，供液相色谱-串联质谱测定。

7.3 测定条件

7.3.1 液相色谱参考条件

a)色谱柱：Intersil C₈, 5um,150 mm×2.1 mm(内径)或相当者；

b)柱温：40℃；

c)流动相：乙腈-0.1％乙酸(4+6) ;

d)流速： 0.30mL/min;

e)进样量：10uL。

7.3.2 质谱参考条件

a)离子源：电喷雾离子源；

b)扫描方式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应监测模式(MRM);

d)监测离子对、定量离子对见表1;

表1 吡喹酮的监测离子对和定量离子对

e)雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压、去集簇电压、碰撞能等电压值应优化至最佳灵敏度，参考质谱参数见表2。

表2 参考质谱参数

7.3.3 液相色谱-串联质谱测定

7.3.3.1 定性测定

被测组分选择1个母离子，2个子离子，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在±2.5％之内；且样品谱图中被测组分监测离子的相对离子丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的监测离子的相对离子丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。

表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

7.3.3.2 定量测定

在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液(4.10)进样，以峰面积为纵坐标，基质混合标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。

7.4 平行试验

按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。

7.5 空白试验

除不称取试样外，均按上述步骤进行。

8 结果计算

河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中吡喹酮残留量的测定结果按式(1)计算：

式中：

x—试样中吡喹酮残留量，单位为微克每千克(ug/kg) ;

c—从标准工作曲线得到的毗唆酮溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL) ;

V—样品溶液最终定容体积，单位为毫升(mL) ;

m—样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克(g)。

计算结果应扣除空白值。

9 精密度

9.1 一般规定

本标准的精密度数据是按照GB/T 6379.1和GB/T 6379.2的规定确定的，重复性和再现性的值以95％的可信度来计算。

9.2 重复性

在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，被测物的添加浓度范围及重复性方程见表4。

表4 添加浓度范围及重复性和再现性方程

如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。

9.3 再现性

在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，被测物的添加浓度范围及再现性方程见表4。

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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