1 范围

本标准规定了河豚鱼、鳗鱼中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量液相色谱-紫外检测方法。

本标准适用于河豚鱼、鳗鱼中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定。

本标准的方法检出限均为0.010 mg/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1:1994,IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD)

3 原理

用0.1mol/L Na₂EDTA-Mcllvaine(pH=4.0±0.05)缓冲溶液提取河豚鱼、鳗鱼中四环素族抗生素残留，提取液经离心后，上清液用Oasis HLBI，或相当的固相萃取柱和羧酸型阳离子交换柱净化，液相色谱-紫外检测器测定，外标法定量。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯。

4.1 水：GB/T 6682，一级。

4.2 甲醇：色谱纯。

4.3 乙腈：色谱纯。

4.4 乙酸乙酯：色谱纯。

4.5 正己烷：色谱纯。

4.6 柠檬酸(C6H8O7·H2O)。

4.7 磷酸氢二钠。

4.8 乙二胺四乙酸二钠(Na₂EDTA·2H₂O)。

4.9 草酸。

4.10 甲酸：优级纯。

4.11 0.1 mol/L柠檬酸溶液：称取21.01g柠檬酸(4.6)，用水溶解，定容至1000 mL。

4.12 0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液：称取28.41g磷酸氢二钠(4.7)，用水溶解，定容至1000mL。

4.13 Mcllvaine缓冲溶液：将1000 mL 0.1mol/L柠檬酸溶液(4.11)与625 mL 0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液(4.12)混合，用NaOH或HCl调pH=4.0±0.05。

4.14 0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液：称取60.5g乙二胺四乙酸二钠(4.8)放入1625mL Mcllvaine缓冲溶液(4.13)中，使其溶解，摇匀。

4.15 0.01 mol/L草酸溶液：称取1.26 g草酸(4.9)用水溶解，定容至1000 mL。

4.16 2％甲酸溶液：量取2mL甲酸(4.10)，用水稀释至1000mL。

4.17 甲醇溶液(1+19)：量取5 mL甲醇(4.2)和95 mL水混合。

4.18 洗脱液：乙腈-甲醇-0.01 mol/L草酸溶液(2+1+7)。

4.19 土霉素(CAS: 2058-46-0)、四环素(CAS: 64-75-5)、金霉素(CAS: 64-72-2)、强力霉素(CAS: 24390-14-5)标准物质：纯度≥95％。

4.20 0.1mg/mL标准储备溶液：准确称取适量的土霉素、四环素、金霉素、强力霉素标准物质(4.19),分别用甲醇配成0.1mg/mL的标准储备液。储备液于-18℃贮存。

4.21 6.0 ug/mL中间浓度混合标准溶液：分别吸取0.6 mL标准储备溶液(4.20)移至10mL容量瓶中，用甲醇稀释成6.0 ug/mL的标准混合溶液。该溶液于-18℃贮存。

4.22 混合标准工作溶液：用洗脱液将中间浓度混合标准溶液(4.21)稀释成0.005 ug/mL、0.010ug/mL、0.050 ug/mL、0.100 ug/mL、0.200 ug/mL不同浓度的混合标准工作溶液，混合标准工作溶液需当天配制。

4.23 Oasis HLB固相萃取柱或相当者：500mg、6mL。使用前分别用5 mL甲醇和10 mL水预处理，保持柱体湿润。

4.24 阳离子交换柱：羧酸型，500 mg. 3 mL。使用前用5 mL乙酸乙酯预处理，保持柱体湿润。

4.25 滤膜：0.2um。

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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