5 仪器

5.1 液相色谱仪：配有紫外检测器。

5.2 分析天平：感量0.1mg、0.01g。

5.3 液体混匀器。

5.4 固相萃取装置。

5.5 贮液器：50 mL。

5.6 高速冷冻离心机：最大转速13000r/min。

5.7 刻度样品管：5 mL,精度为0.1mL。

5.8 真空泵：最大真空度80kPa。

5.9 振荡器。

5.10 具塞聚丙烯离心管。

5.11 pH计：测量精度±0.02。

6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

6.2 试样保存

将试样于-18℃冷冻保存。

7 测定步骤

7.1 提取

称取6g试样，精确到0.01g，置于50 mL具塞聚丙烯离心管(5.10)中，加入20 mL Na₂EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(4.14)，于液体混匀器(5.3)上快速混合1 min，再用振荡器(5.9)振荡10 min,10000r/min离心10 min, 上层提取液倒入另一具塞离心管中，残渣中再加入15 mL Na₂EDTA-Mcllvaine缓冲溶液，重复提取一次，合并提取液。鳗鱼样品的提取液中加入20 mL正己烷，振荡5 min,以4000r/min离心5 min，弃去正己烷相，水相部分待净化。

7.2 净化

将提取液(7.1)倒入下接Oasis HLB固相萃取柱(4.23)的贮液器(5.5)中，提取液以小于3 mL/min的流速通过固相萃取柱，待提取液完全流出后，用5 mL甲醇溶液(4.17)洗柱，弃去全部流出液。固相萃取柱减压抽干40 min，然后用15 mL乙酸乙酯(4.4)洗脱，下接预先处理好的阳离子交换柱(4.24),调节流速小于3 mL/min，待乙酸乙酯全部流出后，取下Oasis HLB柱，用5 mL甲醇淋洗阳离子交换柱，弃去全部流出液。阳离子交换柱减压抽干5 min，再用4 mL洗脱液(4.18)洗脱，收集洗脱液于5 mL样品管中，定容至4 mL，过0.2 um滤膜后，供液相色谱-紫外检测器测定。

7.3 测定条件

7.3.1 液相色谱参考条件

a)色谱柱：BEH C₁₈,1.7 um,50 mm×2.1 mm(内径)或相当者；

b)流速：0.4 mL/min;

c)柱温：30℃；

d)检测波长：350 nm;

e)进样量：10 uL;

f)流动相：A：乙腈，B:2％甲酸溶液，梯度洗脱条件见表1。

表1 梯度洗脱条件

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文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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