7 测定步骤

7.1 混合基质标准校准溶液的制备

7.1.1 样品量取

于50 mL离心管中，分别加入不同量混合标准工作溶液(4.11)，使各被测组分玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烷雌酚、己烯雌酚和双烯雌酚的浓度为2.5ng/mL、5.0 ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL。再分别加入适量内标标准工作溶液(4.13)，使其浓度均为10 ng/mL，在氮吹仪上于40℃水浴中吹干。取5个阴性样品，每个样品为5 mL，置于上述离心管中涡旋混合后，加10 mL乙腈，涡旋混合3min, 3500 r/min离心10 min，取上清液于离心管中，再向样品中加入5 mL乙腈，同前操作，合并提取液，50℃下氮吹至体积小于0.1mL。加水10mL，用5 mol/L NaOH调节pH至11.0，4℃，9000r/min离心5 min，备用。

7.1.2 提取净化

固相萃取净化条件：先用2 mL甲醇,2 mL水将柱子活化，流速均为4 mL/min。将7.1.1样品上清液上柱，流速为1mL/min，依次用1 mL淋洗液(4.8),0.5 mL甲醇以3 mL/min的速度淋洗，通入20mL空气以4 mL/min的速度吹过Oasis MAX柱。用4 mL洗脱液(4.9)洗脱，流速为1 mL/min,加入30 mL空气以6mL/min的速度吹过Oasis MAX柱，收集洗脱液。将洗脱液在氮吹仪上于40℃水浴中吹干，加入1 mL流动相，涡旋30 s溶解。溶液过0.2 um滤膜后，供液相色谱-串联质谱测定。

7.2 实测样品溶液的制备

取待测样品5 mL于50 mL离心管中，加入适量内标标准工作溶液(4.13)，使其最终定容浓度均为10 ng/mL。按7.1.1及7.1.2操作。

7.3 空白基质溶液的制备

取阴性样品5 mL于50 mL离心管中，按7.1.1及7.1.2操作。

7.4 测定条件

7.4.1 液相色谱条件

液相色谱条件如下：

a)色谱柱：ZORBAX Eclipse SB-C₈, 3.5 um,150 mm×4.6 mm(内径)或相当者；

b)柱温：25℃；

c)流动相：乙腈-水(7+3)；

d)流速：0.5mL/min;

e)进样量：50uL。

7.4.2 质谱条件

质谱条件如下：

a)离子化方式：电喷雾电离；

b)扫描方式：负离子扫描；

c)检测方式：多反应监测(MRM) ;

d)离子源温度：350℃；

e)雾化气压力：0.083 MPa;

f)气帘气压力：0.1240 MPa;

g)辅助气1一压力：0.2756 MPa;

h)辅助气2压力：0.2412 MPa;

i)喷雾器电流：-5 uA;

J)电喷雾电压：-4500V;

k)定性离子对、定量离子对、碰撞能量和去簇电压见表1。

表15 种激素及代谢物的定性离子对、定量离子对、碰撞能量和去簇电压

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文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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