1 范围

本标准规定了牛奶和奶粉中乙酰丙嗪(cetopromaizine)、氯丙嗪(chlorpromazin),氟哌啶醇(halo-peridol)、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪(propionylpromazine)、甲苯噻嗪(xylazine)、阿扎哌隆(azaperone)及其代谢物阿扎哌醇(azaperol)和β-阻断剂咔唑心安(carazolol)残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。

本标准适用于牛奶和奶粉中乙酰丙嗪、氯丙嗪、氟哌啶醇、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、甲苯噻嗪、阿扎哌隆、阿扎哌醇、咔唑心安残留量的测定。

本标准方法检出限：牛奶中乙酰丙嗪、氯丙嗪、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、咔唑心安均为0.5 ug/L，甲苯噻嗪为0.25ug/L，阿扎哌隆为0.2 ug/L，阿扎哌醇为0.15 ug/L,氟哌啶醇为0.1ug/L，奶粉中乙酰丙嗪、氯丙嗪、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、咔唑心安均为4.0 ug/kg，甲苯噻嗪为2.0 ug/kg，阿扎哌隆为1.6ug/kg，阿扎哌醇为1.2ug/kg,氟哌啶醇为0.8ug/kg。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6379.1测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第1部分：总则与定义(GB/T 6379.1-2004,ISO 5725-1:1994,IDT)

GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GB/T 6379.2-2004,ISO 5725-2:1994,IDT)

GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T 6682-2008,ISO 3696:1987,MOD)

3 原理

样品在碱性条件下用特丁基甲醚提取，提取液用磷酸盐缓冲液调成酸性，弃去有机相，水相再调成碱性用特丁基甲醚净反萃后浓缩定容，进行液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

4 试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。

4.1 乙腈：色谱纯。

4.2 甲醇：色谱纯。

4.3 无水乙醇：色谱纯。

4.4 盐酸：优级纯

4.5 特丁基甲醚。

4.6 氢氧化钠。

4.7 氢氧化钠溶液：5 mol/L。称取50.0g氢氧化钠(4.6)用水溶解，定容到250 mL。

4.8 磷酸二氢钾。

4.9 磷酸二氢钾溶液：1 mol/L,PH=3.0，称取68.045 g磷酸二氢钾(4.8)用水溶解，用盐酸(4.4)将溶液的pH值调至3.0，定容到500 mL。

4.10甲酸腈。

4.11甲酸：色谱纯。

4.12甲酸腈缓冲液：0.1mol/L, pH=4.0，称取6.306g甲酸铵(4.10)用水溶解，用甲酸(4.11)将pH值调至4.0，定容至1000mL。

4.13 甲酸铵缓冲液：0.01mol/L, pH=4.0，取甲酸铵缓冲液(4.12)100 mL用水稀释定容到1000 mL。

4.14 流动相A:0.01 mol/L甲酸腈缓冲液，pH=4.0(4.13)，通过0.2 um过滤器过滤。

4.15 流动相B：乙腈(4.1)通过0.2um过滤器过滤。

4.16 流动相C：甲醇(4.2)通过0.2um过滤器过滤。

4.17 混合流动相：将70 mL流动相A,15 mL流动相B以及15mL流动相C混合。

4.18 镇定剂及其代谢物和β-阻断剂的标准物质：乙酚丙嗪·马来酸，纯度大于等于99%；阿扎哌隆，纯度大于等于99%；咔唑心安，纯度：99％;氯丙嗪·盐酸，纯度：99%;氟哌啶醇，纯度大于等于99％;丙酰二甲氨基丙吩噻嗪·盐酸，纯度：98％；甲苯噻嗪·盐酸，纯度：99％；阿扎派醇，浓度10.0ug/mL(甲醇)。

4.19 八种镇定剂标准储备溶液

4.19.1 乙酰丙嗪、阿扎哌隆、咔唑心安、氯丙嗪、氟哌陡醇、丙酰二甲氨基丙吩噻嗪、甲苯噻嗪标准储备溶液：0.10mg/mL。称取适量的上述标准物质(4.18)。分别用无水乙醇(4.3)，配成0.10 mg/mL的标准储备液。储备液避光在2℃～4℃条件下贮存。每年配制一次。

4.19.2 阿扎呢醇标准储备溶液：1.0ug/mL。准确移取1.0mL阿扎呢醇标准液(4.18)于10mL容量瓶中，用无水乙醇(4.3)定容至刻度，混匀，配成1.0ug/mL的标准储备液。储备液避光在2℃～4℃条件下贮存。每年配制一次。

4.20 八种镇定剂混合标准储备溶液：量取适量的6种镇定剂及其代谢物标准储备溶液(4.19.1和4.19.2)，用乙腈配制成混合标准储备溶液。在2℃～4℃条件下贮存。

4.21 八种镇定剂混合标准工作溶液：根据每种镇定剂及其代谢物的灵敏度和仪器线性范围用空白样品提取液配成不同浓度的混合标准工作溶液。在2℃～4℃条件下避光贮存。

注：称取标准物的质量是按纯度和含盐量修正过的质量。

5 仪器

5.1 液相色谱-串联四极杆质谱仪：配有电喷雾的离子源。

5.2 电子天平：感量0.1mg和0.1g。

5.3 离心机：最大转速为10000r/min。

5.4 离心管：锥形底玻璃离心管，15mL和10 mL具塞；锥形底聚丙烯离心管，50mL，具螺旋盖。

5.5 过滤器：聚四氟乙烯过滤器，0.2um×13mm；尼龙薄膜过滤器，0.2um×47mm。

5.6 液体分配器：1 mL～10mL和5 mL～50mL。

5.7 微量移吸器：10 uL～100uL和100uL～1000uL。

5.8 流动相过滤装置。

5.9 氮气浓缩仪。

5.10 高速涡流混合器。

5.11 振荡器。

5.12 一次性移液管。

5.13 酸度计：测量精度为±0.02。

5.14 超声波仪。

5.15 一次性注射器：1mL。

5.16 试样瓶：2.0 mL。

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文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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