5 仪器

5.1 液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源。

5.2 分析天平：感量0.1mg和0.01g各一台。

5.3 液体混匀器。

5.4 固相萃取真空装置。

5.5 贮液器：50 mL。

5.6 微量注射器：25 uL，100 uL。

5.7 刻度样品管：5 mL，精度为0.1 mL。

5.8 真空泵：真空度应达到80 kPa。

5.9 离心管：50 mL。

5.10 平底烧瓶：100 mL。

5.11 pH计：测量精度±0.02。

6 试样的制备与保存

6.1 试样的制备

对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60℃的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温。分出0.5 kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。

6.2 试样保存

将试样于常温下保存。

7 测定步骤

7.1 提取

称取6g试样(精确到0.01g)置于150 mL三角瓶中，加入30 mL Na₂ EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(4.11)于液体混匀器上快速混合1 min，使试样完全溶解。样液倒入50 mL离心管中，以3000r/min离心5 min，待净化。

7.2 净化

将上清液(7.1)移至下接Oasis HLB柱(4.13)的贮液器中，以小于等于3 mL/min通过Oasis固相萃取柱后，用5 mL甲醇＋水(4.12)洗柱，弃去全部流出液。在65 kPa的负压下，减压抽干20 min，最后用15 mL乙酸乙酯(4.3)洗脱，收集洗脱液于100mL圆底烧瓶中。

按上述方法使洗脱液(7.2)在减压情况下以小于等于3 mL/min的流速通过阴离子交换柱(4.14)，待洗脱液全部流出后，用5 mL甲醇(4.1)洗柱，弃去全部流出液。在65 kPa负压下，减压抽干5 min,再用4 mL流动相洗脱，收集洗脱液于5 mL样品管中，定容至4 mL，供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.3 测定

7.3.1 液相色谱条件

a)色谱柱：Inertsil C₈-3,5 um,150 mm×2.1 mm(i.d)或相当者；

b)流动相：乙腈＋甲醇+0.4％甲酸溶液(18+4+78);

c)流速：0.2mL/min;

d)柱温：25℃；

e)进样量：20℃；

7.3.2 质谱条件

a)离子源：电喷雾离子源；

b)扫描方式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应监测；

d)电喷雾电压：5500V;

e)雾化气压力：0.055 MPa;

f)气帘气压力：0.079 MPa;

g)辅助气流速：6L/min;

h)离子源温度：430℃；

i)去簇电压：55V;

J)定性离子对、定量离子对和碰撞气能量见表1。

表1 四种四环素族抗生素定性离子对、定量离子对和碰撞气能量

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文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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