7 测定步骤

7.1 淀粉溶液的标定

吸取5.0mL淀粉溶液(4.11)和10.0mL水并分别置于40℃水浴中15 min。将淀粉溶液倒入10.0mL水中并充分混合后，取1.0mL加到10.0mL的碘溶液(4.8)中，混匀，用一定体积的水稀释后，以水为空白对照，用分光光度计于660 nm波长处测定吸光度，确定产生0.760±0.02吸光度所需稀释水的体积数，并以此体积数作为样品溶液的稀释系数。当淀粉来源改变时，应重新进行标定。

7.2 测定

7.2.1 分光光度计条件：

a)波长：660 nm;

b)参比物：水。

7.2.2 样品处理：称取5g试样，精确到0.01g。置于20mL烧杯中，加入15 mL水和2.5 mL乙酸盐缓冲液(4.9)后，移入含有1.5mL氯化钠溶液(4.10)的25 mL容量瓶中并定容(样品溶液应先加缓冲液后再与氯化钠溶液混合)。

7.2.3 吸取5.0mL淀粉溶液、10.0mL样品溶液(7.2.2)和10.0mL碘溶液，分别置于40℃水浴中15 min。将淀粉溶液倒入样品溶液中并以前后倾斜的方式充分混合后开始计时。

7.2.4 5 min时取1.0mL样品混合溶液(7.2.3)加入10.0mL的碘溶液中，再用淀粉溶液标定时确定的稀释水的体积数进行稀释并用前后倾斜的方式充分混匀后，以水为空白对照，用分光光度计于660 nm波长处测定吸光度。

7.2.5 如吸光度大于0.235(特定吸光度)，应继续按7.2.4步骤重复操作，直至吸光度小于0.235为止。

7.2.6待测期间，样品混合溶液、碘溶液和水应保存在40℃水浴中。

7.3 计算

在对数坐标纸上，以吸光度(％)为纵坐标，时间(min)为横坐标，将所测的吸光度与其相对应的时间在对数坐标纸上标出，连接各点划一直线。从直线上查出样品溶液的吸光度与0.235交叉点上的相对应时间，结果按式(1)计算：

式中：

X—样品溶液中的淀粉酶值，单位为毫升每克小时[mL/(g·h)];

t—相对应时间，单位为分(min)。

计算结果表示到小数点后一位。

注：如5 min时初测的数据已接近吸光度0.235，而另一测定数据又很快达到吸光度0.200左右，说明该样品的淀粉酶值含量高[大于35 mL/(g·h)]。但为了结果的准确，应重复测定。即从开始计时起，每分钟测定一次；对于淀粉酶值含量低的样品，应每10 min测定一次，通过若干个数据划线即可预测其终点值，但5 min时初测的数据不能用于终点值的预测。

8 精密度

本部分的精密度数据是按照 GB/T 6379的规定确定的，其重复性和再现性的值是以95％的可信度来计算。

8.1 重复性

在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(r)。本部分的重复性限按方程式(2)计算：

r＝0.5508m-5.7854······(2)

式中：

m—两次测定值的平均值，单位为毫升每克小时[mL/(g·h)]。

如果两次测定值的差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。

8.2 再现性

在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)。本部分的再现性限按方程式(3)计算：

R=-0.1974 m＋5.9927······(3)

式中：

m—两次测定值的平均值，单位为毫升每克小时[mL/(g·h)]。

相关链接：蜂蜜中淀粉酶值的测定方法（一）

文章来源：《常用兽药残留量检测方法》

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