7.2 乳酸脱氢酶活性测定方法

7.2.1 制样

7.2.1.1 样品制备

切取对照样品的肌肉几何中心组织10 g，分两份。每份5g，其中一份室温放置，命名该样品为C(control)；一份在恒温水浴加热，如果待验样品有加热温度和加热时间的检测要求则按具体要求检测，如果待验样品只要求检测样品是否热变性，则按照热加工温度75℃1 min的要求来检测，对照样品中心放置探针式温度计，待样品中心温度达到要求温度时开始计时，再加热到所要求的加热时间，命名该样品为H(heat)。

将样品C、样品H和待验样品切碎后，经组织粉碎机粉碎，混匀，装入洁净容器内，作为试样，密封，并标明标记。

7.2.1.2 样品保存

抽样后样品应立即在-18℃以下冷冻保存，0℃～5℃条件下48 h内送达实验室。在抽样和制样过程中，应防止样品受到温度变化的影响。

7.2.1.3 样品提取

称取5g(精确到0.01g)粗粉碎样品到50 mL离心管中，加入15 mL磷酸盐缓冲液，用均质器低速均质至糜状，均质过程中保持冰浴。4 000r/min 4℃离心5min，取上清液进行分析。

7.2.2 检测

7.2.2.1 标准曲线的绘制

按表1进行操作，室温放置5 min后，波长440 nm比色杯1.0 cm，用B管调零，读取各管吸光度，并与相应的酶活力单位绘制标准曲线。

表1 标准曲线配置

7.2.2.2 样品测定

按表2进行操作．室温放置5 min后，波长440nm比色杯1.0 cm，用蒸馏水调零，读取各管吸光度。

表2 样品测定

7.2.2.3 结果的计算

绘制标准曲线，以吸光值为纵坐标，相当的LDH酶活单位为横坐标绘制标准曲线。每次试验均应重新绘制标准曲线，从标准曲线上读取待测样品中的酶活单位，并对样品C(control)和样品H (heat)的酶活进行t检验，以判断是否有显著差异。

8 结果判定

8.1 SDS-PAGE电泳法结果判定

如果样品C (control)和样品H (heat)的电泳条带显示一致，说明送检样品已经达到要求的加热温度和加热时间。

如果样品C(control)比样品H (heat)的电泳条带多，说明送检样品没有达到要求的加热温度和加热时间。

如果样品C(control)比样品H (heat)的电泳条带少，说明样品H前处理没有达到要求的加热温度和时间，需要重新进行样品H前处理。

在已知样品要求样品加热温度和时间的条件下，检测合格样品为达到已知温度和时间；检测不合格样品为没有达到已知的温度和时间。

8.2 乳酸脱氢酶活性法结果判定

如果待验样品和样品H (heat)的酶活无显著差异，说明该样品已经达到要求的加热温度和加热时间。

如果待验样品和样品H (heat)的酶活有显著差异，说明该样品没有达到要求的加热温度和加热时间。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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