3.4 测定步骤

3.4.1 提取和净化

称取约2g试样(精确至0.01g)，置于15 mL，离心管内，加入0.5 mL 10％硫酸钠水溶液和5mL乙腈-三氯甲烷(10+1)混合液。在快速混匀器上剧烈混合成匀浆，以提取乙胺嘧啶。其后，以3000r/min速度离心3 min。用尖嘴吸液管将上清液转入第二支15 mL离心管内，再用2 mL乙腈-三氯甲烷(10+1)混合液提取残渣，离心3 min，提取液并入第二支离心管。将该离心管置于多功能微量化样品处理仪上，于40℃以下蒸发至干。向残渣中加入1 mL 2％硫酸钠水溶液和2 mL正己烷，在快速混匀器上剧烈混合，使残渣溶解，离心3 min。用尖嘴吸液管移去正己烷层，并舍弃。再用2 mL正己烷洗水相一次，同法弃正己烷相。分别向水相中加入3 mL、2 mL、乙腈-三氯甲烷(1+2)混合液，于快速混匀器上剧烈混合，以提取水相中乙胺嘧啶，离心3 min。用尖嘴吸液管将下层有机相转入第三支离心管内，于多功能微量化样品处理仪上，在40℃以下蒸发至干。以流动相溶解残渣，并准确定容为1.0 mL。经0.45 um滤膜过滤，供HPLC测定。

3.4.2 测定

3.4.2.1 液相色谱条件

a)色谱柱：ODS-C₁₈色谱柱，5 um(粒径),15 cm × 4.6 mm(内径)；

b)柱温：40℃；

c)流动相：甲醇-水-乙酸(40+60+0.6) ;

d)流速：0.7 mL/min；

e)检测器：UV；

f)检测波长：232 nm；

g)进样量：20 uL。

3.4.2.2 色谱测定

根据样液中乙胺嘧啶含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中乙胺嘧啶响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积穿插进样测定。在上述色谱条件下，乙胺嘧啶保留时间约为7.8 min。

3.4.3 空白试验

除不加试样外，均按上述测定步骤进行。

3.5 结果的计算和表述

用色谱数据处理机，或按式(1)计算试样中乙胺嘧啶残留量：

式中：X—试样中乙胺嘧啶残留含量，mg/kg；

h—样液中乙胺嘧啶峰高，mm；

h_s—标准工作溶液中乙胺嘧啶峰高，mm；

c—标准工作溶液中乙胺嘧啶浓度，ug/mL；

V—样液最终定容体积，mL;

m—称取的试样量，g。

注：计算结果需扣除空白值。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法的测定低限为0.02mg/kg。

4.2 回收率

鸡肉中乙胺嘧啶添加浓度及其回收率的实验数据：

在0.02 mg/kg时，回收率为96.5％;

在0.05 mg/kg时，回收率为92.0％；

在1.00 mg/kg时，回收率为86.4％。

相关链接：出口禽肉中乙胺嘧啶残留量检验方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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