3.4 测定步骤

3.4.1 提取和净化

称取试样约10 g(精确至0. 1g)，置于100 mL锥形瓶中，加75 mL提取液，搅拌后，超声提取5 min。将提取液过滤到分液漏斗中，加50 mL氯化钠溶液，用2×35 mL二氯甲烷萃取。收集二氯甲烷层，过无水硫酸钠柱滤入浓缩瓶中。于45℃浓缩至干。加7 mL，二氯甲烷以溶解残留物，过硅胶小柱(小柱预先用3 mL 二氯甲烷浸润)，流速刁、于5 mL/min，再加3 mL二氯甲烷淋洗浓缩瓶，一并过柱，弃去流出液。用10 mL二氯甲烷淋洗小柱，弃去流出液。然后用5 mL 二氯甲烷-甲醇(95+5)溶液洗脱柱上的莫能菌素。洗脱液收集于浓缩瓶中，在45℃旋转蒸发至干。用甲醇定容至1.0 mL，溶液供液相色谱测定。

3.4.2 测定

3.4.2.1 液相色谱条件

a)色谱柱：OondapakTM C₁₈, 300 mm × 3.9 mm(内径)，5 um，或相当的色谱柱；

b)流动相：甲醇-水-磷酸(940+60+1)，0.7 mL/min；

c)柱后衍生试剂：边搅拌边将20 mL浓硫酸慢慢加到950 mL甲醇中，冷却至室温，加30.0g香兰素，搅拌至溶解。流速：0.7 mL/min；

d)柱后反应室：体积＞1. 4 mL不锈钢管300 cm X 1 mm(内径)，柱后反应温度：90℃;

e)检测波长：520 nm;

f)进样量：100 uL。

3.4.2.2 色谱测定

根据样液中莫能菌素含量的情况选定峰面积相近的标准工作溶液。标准溶液和样液中莫能菌素的响应值均应在仪器检测的线性范围内。标准溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下莫能菌素衍生物的保留时间约为6.5 min。

3.4.3 空白试验

除不加试样外，均按上述操作步骤进行。

3.4.4 结果计算和表述

按式(1)计算试样中莫能菌素的残留含量：

式中：X—试样中莫能菌素的残留含量，mg/kg；

A—样液中莫能菌素衍生物的峰面积，mm2；

A_s—标准工作液中莫能菌素衍生物的峰面积，mm2；

c—标准工作液中莫能菌素的浓度，ug/mL；

V—样液最终定容体积，mL;

m—最终样液所代表的试样量，g。

注：计算结果需扣除空白值。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法的测定低限为0.020 mg/kg。

4.2回收率

鸡肉中莫能菌素添加浓度及其回收率的实验数据：

在0.020 mg/kg，回收率为94.6％；

在0.050 mg/kg，回收率为93.6％；

在0.200 mg/kg，回收率为95.7%。

相关链接：出口肉及肉制品中莫能菌素残留量检验方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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