3.4 测定步骤

3.4.1 提取和净化

称取约10g试样(精确至0.1g)置于100 mL锥形瓶中，加入30 mL混合提取液，振荡提取30 min,过滤。残渣用30 mL混合提取液，再提取一次。滤液合并于250 mL分液漏斗中，加入50 mL氯化钠溶液，用40 mL、10 mL二氯甲烷提取两次。合并二氯甲烷层，过无水硫酸钠柱脱水，收集流出液，于45℃水浴上旋转浓缩至近干。加5 mL甲醇以溶解残渣，并将溶液转移至10 mL离心管中。加1 mL正己烷和 1.5mL水，充分混匀，于2000r/min离心2 min，弃去正己烷层。再加入1 mL正己烷，混匀，离心，弃去正己烷层。加1 mL 二氯甲烷，再加水至10 mL，充分混匀，于2000r/min离心2 min。将二氯甲烷层转入另一支离心管中。水相再用1 mL 二氯甲烷提取一次，合并二氯甲烷层。用氮气流吹至近干后，加二氯甲烷并定容到1.00 mL，供气相色谱/质谱检测器测定。

3.4.2 测定

3.4.2.1 气相色谱/质谱条件

a)色谱柱：HP-1,12 m × 0.2 mm(内径)× 0.25 um(膜厚)，石英毛细管柱；

b)载气：氦气，纯度≥99.99％；1.0 mL/min；

c)柱温：程序升温

d)进样口温度：250℃；

e)色谱-质谱接口温度：280℃；

f)进样方式：无分流进样，1 min后开阀；

g)电离方式：电子轰击电离(EI)；

h)电离能量：70 eV;

i)测定方式：选择离子监测方式(SIM)；

J)选择监测离子(m/z) :314,272 amu；

k)溶剂延迟：12 min；

i)进样量：2uL。

3.4.2.2 气相色谱/质谱测定

根据样液中黄体酮含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中黄体酮响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述气相色谱/质谱条件下，黄体酮的保留时间约为14 min。

3.4.3 空白试验

除不加试样外，均按上述测定步骤进行

3.5 结果计算和表述

用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中黄体酮残留含量：

式中：X—试样中黄体酮的残留含量, mg/kg；

A—样液中黄体酮的峰面积，mm2；

A_s—标准工作溶液中黄体酮的峰面积，mm2；

c—标准工作溶液中黄体酮的浓度，ug/mL；

V—样液最终定容的体积，mL；

m—最终样液所代表的试样量，g。

注：计算结果需扣除空白值。

4 测定低限、回收率

4.1 测定低限

本方法的测定低限为0.003 mg/kg。

4.2 回收率

牛肉中黄体酮的添加浓度及其回收率的实验数据：

在0.003 mg/kg时，回收率为97.0％；

在0.010 mg/kg时，回收率为96.3％；

在0.030 mg/kg时，回收率为96.7％。

相关链接：出口肉及肉制品中黄体酮残留量检验方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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