3.4 测定步骤

3.4.1 提取和净化

称取约5g(精确至0.1g)试样(经熔炼的脂肪)于25 mL离心管中，加10 mL正己烷，塞上塞子，振摇至脂肪溶解为止。加入1 mL氢氧化钠溶液(5 mol/L)，缓缓振摇2 min。再加入4 mL重蒸水，缓缓振摇1 min。以1500r/min离心2 min，吸去有机层(正己烷)。在水相中再加入10 mL正己烷，旋摇离心管使溶液混匀。以1500r/min离心1 min，吸去有机层(正己烷)。

3.4.2 酯化

在水相中加入5 mL正己烷和0.3mL乙酸酐，用力振摇1 min。以1500r/min离心2 min，吸取正己烷相，转入10 mL离心管中。然后在水相中再加入5 mL正己烷和0.3 mL乙酸酐，用力振摇1 min,在1500r/min离心2 min，正己烷相合并转入10 mL离心管中。在60℃水浴，氮气流下将正己烷相浓缩至约0.5 mL，加正己烷定容至1.0 mL，供气相色谱-质谱测定。

3.4.3 标准物酯化

取适用浓度的标准工作溶液于10 mL离心管中，加1 mol/L氢氧化钠溶液至5 mL，按3.4.2进行酯化反应。

3.4.4 测定

3.4.4.1 气相色谱-质谱条件

a)色谱柱：HP-5，30 m×0.25 mm(id)×0.25 um熔融石英毛细管柱或相当的色谱柱；

b)柱温：

c)进样口温度：250℃;

d)色谱-质谱接口温度：280℃;

e)载气：氦气，纯度≥99.999％，流速1 mL/min;

f)进样量：2 uL;

g)进样方式：无分流进样，1 min后开阀；

h)电子轰击源(EI);

i)电离能量：70 eV；

j)电子倍增器电压：自动调谐加200 V；

k)测定方式；选择离子监测方式(SIM)；

i)选择监测离子(m/z) ;108，150u；

m)溶剂延迟：4 min。

3.4.4.2 色谱-质谱测定

根据样液中甲酚含量的情况选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中甲酚衍生物的响应值均应在仪器检测的线性范围内。标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，甲酚衍生物的保留时间约为5 min。

3.4.5 空白试验

除不加试样外，均按上述操作步骤进行。

3.4.6 结果计算和表述

用色谱数据处理机或按式(1)计算试样中甲酚的残留含量：

式中：X—试样中甲酚的残留含量，ug/kg；

A—样液中甲酚衍生物的峰面积，mm2；

As—标准工作液中甲酚衍生物的峰面积，mm2；

c—标准工作液中甲酚的浓度，ng/mL；

V—样液最终定容体积，mL；

m—最终样液所代表的试样量，g。

注：计算结果需扣除空白值。

4 测定低限和回收率

4.1 测定低限

本方法的测定低限为1.0 ug/kg。

4.2 回收率

鸡脂肪中甲酚添加浓度及其回收率的试验数据：

在1.0 ug/kg添加水平时，回收率为93.3％;

在10.0 ug/kg添加水平时，回收率为97.4％;

在50.0 ug/kg添加水平时，回收率为95.0％。

相关链接：出口肉及肉制品中甲酚残留量检验方法（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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