4.4.3 测定

4.4.3.1 用压杆将竞争性结合试剂压入一洁净的硅硼酸盐玻璃试管内，加入300 uL水，用涡旋振荡器振荡10 s，使试剂振碎完全。

4.4.3.2 加5.0 mL样品提取液(4.4.2.3)，或阴性对照液(4.4.1.1)或阳性对照液(4.4.1.2)到试管中，混匀15 s，使样品上下混匀15次，置于恒温孵育器中于50℃±1℃孵化3 min，取出混匀15 s，再置于恒温孵育器中50℃±1℃孵化3 min。

4.4.3.3 用压杆将[³H]标记的氯霉素压入试管中，用旋涡混合器振荡15 s，使样品上下混合15次，置于恒温孵育器中50℃±1℃孵化3 min。

4.4.3.4 取出试管，于3300r/min离心10 min，立即取出试管，倒掉上清液，用棉签将试管边缘的污渍擦去。

4.4.3.5 加300uL水到试管内，振荡并混合混匀，再加入3.0 mL闪烁液(4.2.2.7)至试管中，涡旋混匀至试管内没有不均的云状物。

4.4.3.6 将试管放入液体闪烁计数仪内，在[³H]频道进行60 s LSC计数，读cpm值。

4.5 控制点的确定

控制点是判断样品阴性与初筛阳性的一个界定值，可根据筛选水平自行设定。对于同一批号的试剂，正常情况下只需测定1次控制点。控制点设定步骤如下：

称取20.0g均质好的空白组织样品，加入0.6 mL 10 ug/L氯霉素抗生素标准溶液，按4.4.2试样提取和4.4.3放射免疫测定；测定六个加标样品的cpm值，求出cpm平均值乘上系数1.2，即为筛选水平0.3ug/kg的控制点。

注：空白样品应是不含抗生素残留的样品，即如果测得某个样品cpm值在阴性对照液的cpm值±20％左右波动，可认为其不含氯霉素抗生素。

5 结果判定

5.1 将测得结果与控制点对照，当样品cpm值大于控制点50以上时，判定样品为“阴性”，即样品中氯霉素含量低于筛选水平。

5.2 将测得结果与控制点对照，当样品cpm值等于或小于控制点，视为“初筛怀疑阳性”，此时应重新测定样品、阴性对照液和阳性对照液的cpm值。阴性对照液和阳性对照液的cpm值需在正常范围波动(见试剂盒性能监测)，当重新测定样品的cpm值大于控制点，判定为“阴性”；小于或等于控制点，则判定为“初筛阳性”。

5.3 将测得结果与控制点对照，当样品cpm值超出控制点，但不足50时，重新计数，如果重新计数cpm值低于控制点，则判定样品为“初筛阳性”。

6 试剂盒性能监测

对每一批新的检测试剂需测定零点基准值，测定6次阴性对照液cpm值，其平均值即为零点基准值。当遇到“初筛怀疑阳性”样品时，通过测定阴性对照液和阳性对照液的cpm值与零点基准值的cpm值比较，可确定试剂和液体闪烁计数仪是否正常。

a)正常情况下，阴性对照液cpm值在零点基准值cpm值上下波动，幅度约±15％;

b)正常情况下，阳性对照液cpm值小于控制点；

c)正常情况下，阳性对照液cpm值与阴性对照液cpm值的比值应小干0.7;

d)山如果测定结果与以上要求不相符，应重新测定零点基准值和控制点，并重新测定样品。

7 检测低限

在水产品中，氯霉素残留检测低限为0.3 ug/kg。

8 确证

如被测样品中氯霉素残留筛选结果为阳性的，应用其他方法进行确证。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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