1 范围

本标准规定了蜂王浆中螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素、泰乐菌素、红霉素、罗红霉素、交沙霉素残留量的制样和液相色谱串联质谱测定方法。

本标准适用于蜂王浆中螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素、泰乐菌素、红霉素、罗红霉素、交沙霉素残留量的检测。

2 方法提要

样品用甲醇沉淀蛋白质，在磷酸盐缓冲盐溶液介质下，再用C₁₈固相萃取小柱净化，液相色谱串联质谱测定，外标法定量。

3 试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。

3.1 乙腈：高效液相色谱级。

3.2 甲醇：高效液相色谱级。

3.3 甲酸：高效液相色谱级。

3.4 氢氧化钠。

3.5 磷酸二氢钠。

3.6 0.1 mol/L氢氧化钠溶液：称取4g氢氧化钠，并用水稀释至1 L。

3.7 甲醇水溶液：甲醇-水(2+8，体积比)。

3.8 磷酸盐缓冲溶液：溶解13.8 g磷酸二氢钠于950 mL水中，用0.1 mol/L氢氧化钠溶液调节溶液pH值到8.0，最后用水稀释至1 L。

3.9 螺旋霉素、替米考星、竹桃霉素磷酸盐、泰乐菌素酒石酸盐、红霉素、罗红霉素、交沙霉素标准品：纯度大于等于95％。

3.10 7种大环内酯标准储备溶液：称取适量标准品(3.9)，分别用甲醇溶解，溶液浓度为100 ug/mL,1℃～4℃冰箱保存。有效期三个月。

3.11 标准工作溶液：根据需要用空白样品溶液将标准储备液稀释成2.5 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL的混合标准工作溶液，相当于样品中含有5 ug/kg、10 ug/kg、20 ug/kg、100 ug/kg、200 ug/kg大环内酯。

3.12 C₁₈固相萃取小柱，500 mg或相当者，使用前依次用5 mL甲醇，5 mL水预洗。

4 仪器和设备

4.1 高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源。

4.2 旋转蒸发器。

4.3 固相萃取装置。

4.4 高速离心机：7 000r/min。

4.5pH计。

4.6 旋涡混合器。

4.7 氮吹仪。

5 试样制备与保存

取500 g代表性蜂王浆样品，在室温下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装入样品瓶中，密封，并标明标记。一份作为试验样，另一份在-18℃保存。

在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。

6 测定步骤

6.1 提取

称取2g试样(精确到0.01g)置于50mL具塞离心管中，加5 mL水，混匀，静置5 min，再加甲醇至10.0 mL，于旋涡混合器上以2000 r/min混匀1 min，于6000r/min离心5 min，过滤，移取5.0 mL滤液，加15 mL磷酸盐缓冲溶液(3.8)稀释，混匀。

6.2 净化

将溶液转移至固相萃取小柱中(3.12)，再用5 mL水和5 mL甲醇水溶液(3.7)依次洗涤浓缩瓶，洗涤液过固相萃取小柱，弃去流出液，在负压下抽干，用6 mL甲醇洗脱，控制流速1 mL/min～2 mL/min,收集全部洗脱液于10 mL离心管中，洗脱液在50℃以下水浴下平缓氮气吹至约1 mL，用水定容至2.0mL,混匀，溶液过0.45um,滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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