7 检测步骤

7.1 庆大霉素-新霉素族残留测定(用于庆大霉素、新霉素、卡那霉素、安普霉素、巴龙霉素的测定)

7.1.1 阴性和阳性对照液的配制

7.1.1.1 阴性对照液的配制：取2.0 mL Ag萃取缓冲液加入6.0mL 水稀释：混匀后取出4.0mL作为阴性对照液，使用前配制。

7.1.1.2 阳性对照液的配制：取0.3 mL MSU多抗生素标准溶液加至6.0 mL Ag萃取缓冲液中，混匀后取出2.0 mL，用6.0 mL水稀释，取出4.0 mL作为阳性对照液，使用前配制。

7.1.2 提取

称取20.0g样品于50 mL具塞离心管中，加入20 mL Ag萃取缓冲液，均质1 min，涡旋混匀3 min,于80℃恒温加热器中温育30 min，取出后放置冰水浴中冷却10 min，于3300r/min离心10 min，转移全部上清液于另一50 mL离心管中，用0.1mol/L氢氧化钠溶液(5.5)或0.1 mol/L盐酸溶液(5.6)调节pH值6.0，此样液待测定。

7.1.3 检测步骤

7.1.3.1 用药片压杆的平端，将白色受体试剂药片压入8 mL离心管中，加入0.3 mL水，涡旋混匀10s。

7.1.3.2 向离心管中加入4.0 mL样品提取液(7.1.2)，压入黄色庆大霉素氖标记物药片，涡旋混匀15 s,35℃±1℃温育5 min。

7.1.3.3 温育后取出于3300r/min离心5 min，立即倾去全部上清液，将试管内的脂肪环和壁上残留水溶液用棉签擦试干净。

7.1.3.4 加入0.3mL水，涡旋混匀10s，将试管中的沉淀物溶解。加入3 mL闪烁液(5.7)，加盖，涡旋混匀后放入Charm Ⅱ 7600分析仪内，[³H]频道计数60 s，测定cpm值。

7.2 链霉素族残留测定(用于链霉素和双氢链霉素的测定)

7.2.1 阴性和阳性对照液的配制

7.2.1.1 阴性对照液的配制：取6.0 mL MSU萃取缓冲液与2.0 mL阴性浓缩液混匀，取出2.0 mL作为阴性对照液，使用前配制。

7.2.1.2 阳性对照液的配制：取0.30 mL MSU多抗生素标准品溶液，加至6.0 mL、阴性浓缩液中，混匀后取出2.0 mL，用6.0 mL MSU萃取缓冲液稀释，取出2.0 mL作为阳性对照液，使用前配制。

7.2.2 提取

称取10.0g样品于50 mL具塞离心管中，加入30 mL MSU萃取缓冲液，均质1 min，涡旋混匀3 min，于80℃恒温加热器中温育30 min，取出后放置冰水浴中冷却10 min，于3300r/min离心10 min,转移全部上清液于另一50 mL离心管中，用M2缓冲液调节pH值7.5，此样液待测定。

7.2.3 检测步骤

7.2.3.1 用药片压杆的平端，将白色受体试剂药片压入8 mL离心管中，加入0.3 mL水，涡旋混匀10s。

7.2.3.2 向离心管中加入2.0 mL样品提取液(7.2.2) ,涡旋混匀10 s,35℃±1℃温育2 min。

7.2.3.3 取出后将绿色链霉素氘标记物药片压入离心管，涡旋混匀10 s,35℃±1℃温育2 min。

7.2.3.4 温青后取出于3 300 r/min离心5 min，立即倾去全部上清液，将试管内的脂肪环和壁上残留水溶液用棉签擦试干净。

7.2.3.5 加入0.3 mL水，涡旋混匀10 s，将试管中的沉淀物溶解。加入3 mL闪烁液(5.7)，加盖，涡旋混匀后放入Charm U 7600分析仪内，[³H]频道计数60 s,测定cpm值。

8 结果判定

8.1 控制点的确定

8.1.1 庆大霉素-新霉素族残留控制点的确定

称取20.0g同类空白样品，添加0.2 mL MSU多抗生素标准品溶液，充分混匀，按7.1.2和7.1.3进行提取与测定，测定6个非重复加标样品的cpm计数值，取结果平均值，该平均值乘以系数1.3即为控制点。

8.1.2 链霉素族残留控制点的确定

称取10.0g同类空白样品，添加0.5 mL MSU多抗生素标准品溶液，充分混匀，按7.2.2和7.2.3进行提取与测定，测定6个非重复加标样品的cpm计数值，取结果平均值，该平均值乘以系数1.3即为控制点。

8.2 结果判定

样品的cpm计数值大于控制点时，则判断为阴性；样品的cpm计数值小于或等于控制点时，应重新测定样品；对于庆大霉素-新霉素族需重新测定阴性对照液(7.1.1.1)和阳性对照液(7.1.1.2)；对于链霉素族需重新测定阴性对照液(7.2.1.1)和阳性对照液(7.2.1.2)，其cpm计数值应在正常范围内波动。当重新测定样品的计数值大于控制点时，判定为“阴性”；小于或等于控制点时，则判定为“初筛阳性”。

9 确证试验

本标准为筛选方法，对于阳性样品，需用其他方法进行确证。

10 方法检出限

链霉素方法检出限为500 ug/kg；双氢链霉素方法检出限为500 ug/kg；庆大霉素方法检出限为50 ug/kg；新霉素方法检出限为30 ug/kg；卡那霉素方法检出限为100 ug/kg；安普霉素方法检出限为300 ug/kg；巴龙霉素方法检出限为300 ug/kg。

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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