7 测定步骤

7.1 提取

7.1.1 固态高含量样品

准确称取0.5g试样(精确到0.01g)于50 mL离心管中，加入2g无水硫酸钠、20 mL乙腈，用均质器以10000r/min均质1 min，以4000r/min离心5 min，上清液转移至50 mL具塞离心管中，样品用10 mL 乙腈重复上述提取、离心操作，合并两次提取的上清液，加入经乙腈饱和的正己烷溶液10 mL,用旋涡振荡器混匀2 min后，以4000r/min离心3 min，弃去上清液，下层过无水硫酸钠柱，转移至鸡心瓶，浓缩近干后待净化。

7.1.2 固态低含量样品

准确称取5.0g试样(精确到0.01g)于50 mL离心管中，以下同7.1.1。

7.1.3 液态样品

准确量取5.0mL试样于50 mL离心管中，加入2g氯化钠、10 mL乙腈，旋涡振荡3 min,以4000r/min离心5 min，取上清液5 mL于15 mL离心管中，加入经乙腈饱和的正己烷溶液10 mL，用旋涡振荡器混匀2 min后，以4000r/min离心3 min，弃去上清液，下层用氮吹仪浓缩至近干，待净化。

7.2 净化

残渣用2.0 mL二氯甲烷-丙酮(8+2)溶液溶解，以1 mL/min～2 mL/min的速度过中性氧化铝固相萃取柱，再用2.0 mL二氯甲烷-丙酮(7+3)溶液分两次洗涤浓缩瓶，过中性氧化铝固相萃取柱，弃去流出液，待上样液流出后，用10 mL甲醇-丙酮(8+2)溶液洗脱，洗脱液于氮吹仪浓缩至近干，用1.0mL乙腈-水(4+6)溶液溶解残渣，经0.22 um滤膜过滤，供液相色谱-质谱/质谱测定。

7.3 测定

7.3.1 液相色谱条件

a)色谱柱：C₁₈ 1.7 um, 2.1(内径)×50 mm，或相当者；

b)流动相：乙腈，水＝4：6;

c)流速：0.25 mL/min或根据仪器条件优化；

d)柱温：30℃；

e)进样量：5 uL。

7.3.2 质谱条件

a)离子源：电喷雾离子源；

b)扫描方式：负离子；

c)检测方式：多反应监测(MRM)；

7.3.3 液相色谱-质谱/质谱测定

7.3.3.1 定量测定

根据样液中二硝托胺的浓度大小，选定峰高相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中二硝托胺的响应值均应在仪器的检测线性范围内。

7.3.3.2 定性测定

在相同的试验条件下，样品与标准工作液中待测物质的质量色谱峰相对保留时间在2.5％以内，并且在扣除背景后的样品质量色谱图中，所选择的离子对均出现，同时与标准品的相对丰度允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。

表1 使用定性液相色谱-质谱/质谱时相对离子丰度最大允许偏差

8 空白试验

除不加试样外，均按上述操作步骤进行。

9 结果计算和表述

用数据处理软件中的外标法，或绘制标准曲线，按照式(1)计算样品中二硝托胺的含量。

式中：

x—试样中待测组分含量，单位为毫克每千克(ug/kg);

c—由标准曲线而得的样液中待测组分的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL);

V—样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；

m—最终样液所代表的试样质量，单位为克(g)。

10 测定低限、回收率

10.1 测定低限

本方法二硝托胺测定低限为5 ug/kg。

相关链接：进出口动物源性食品中二硝托胺残留量的测定（一）

文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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