5 仪器和设备

5.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源。

5.2 天平：感量为0.0001g和0.01g。

5.3 固相萃取装置。

5.4 离心机：大于等于6000r/min。

5.5 旋涡混合器。

5.6 旋转蒸发器。

5.7 具塞离心管：聚四氟乙烯，50mL。

6 试样制备与保存

取500 g代表性蜂王浆样品，在室温下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装入样品瓶中，密封，并标明标记。一份作为试验样，另一份在-18℃保存。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。

7 测定步骤

7.1 提取

称取2g试样(精确到0.01g)置于50 ml.具塞离心管中，加0.2 mL同位素内标混合标准溶液(150 ng/mL)和10 mL水，混匀，静置2 min，再加甲醇至20 mL，于旋涡混合器上以2000 r/min混匀1 min，以6000r/min离心5 min，过滤，移取5.0mL上清液，加25 mL水，混匀，待净化。

7.2 净化

将溶液转移至Oasis HLB固相萃取小柱中(4.12)，弃之流出液，加5 mL，水和5 mL甲醇水溶液(4.5)淋洗，抽干，用4 mL 5％氨水甲醇洗脱(4.6)，控制流速1 mL/min～2 mL/min，收集全部洗脱液于10 mL、离心管中，将洗脱液用乙腈转移至浓缩瓶中，在45℃以下水浴下减压浓缩至近千，用1.0 mL乙腈-甲醇一0.15％甲酸(2+20+78，体积比)溶解残渣，混匀，过0.45 um,滤膜，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

7.3 测定

7.3.1 液相色谱-串联质谱条件

a)色谱柱：C₈ 柱，150 mm×4.6 mm(内径), 5 um或相当者；

b)流动相梯度洗脱程序见表1;

表1梯度洗脱程序

c)流速：0.4 mL/min;

d)进样量：50uL;

e)离子源：电喷雾离子源；

f)扫描方式；正离子扫描：

g)检测方式：多反应监测；

h)雾化气压力(GSl)、气帘气压力(CUR)、辅助气流速(GS2)均为高纯氮气或其他合适气体；使用前应调节各气体流量以及离子源温度(TEM)使质谱灵敏度达到检测要求。

7.3.2 高效液相色谱-串联质谱测定

根据试样中被测样液的含量，选定浓度相近的混合基质标准溶液，待测物的响应值应在仪器检测的线性范围内。对混合基质标准溶液及样液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下麻保沙星、依诺沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星、洛美沙星、奥比沙星、双氟沙星、沙拉沙星、司帕沙星、噁喹酸、萘啶酸、氟甲喹的参考保留时间分别约为12.4 min、13.3 min、3.8 min、14.5 min、14.8 min、14.8 min、15.1 min、15.1 min、15.2 min、15.5 min、15.5 min、15.5 min、17.0 min、19.1 min、19.4min。

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文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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