6 样品制备与保存

6.1 动物内脏、肌肉

从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500 g，用组织捣碎碎机充分捣碎均匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于-18℃以下冷冻存放。

6.2 牛奶、蜂蜜样品

从所取全部样品中取出有代表性样品500 g，充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封，并标明标记，于-18℃以下冷冻存放。

在操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。

7 测定步骤

7.1 样品提取

7.1.1 动物组织(肝、肾、肌肉等)

称取试样1g(精确到0.01g)，置于50 mL具螺旋盖聚丙烯离心管中，加入50 uL混合氘代内标工作溶液(4.14.6)，放置15 min，加入硅藻土3g(精确到0.1g) (4.7)和5 mL乙腈(4.1)，在均质器中15 000 r/min均质30 s，加入60 uL β-葡糖苷硫酸酯酶(4.6)，涡旋混匀30 s,37℃振荡温育过夜。放冷至室温，于4℃ , 4 000 r/min离心5 min，收集上清液于另一个干净的15 mL玻璃试管中。向离心残渣中再加入5 mL乙腈(4.1) ,涡旋混匀30 s，室温超声提取5 min，于4℃ ,10 000 r/min离心5 min，收集上清液，合并2次提取液，氮气流吹干。1 mL乙腈(4.1)溶解残渣，加入1 mL乙腈饱和正己烷溶液(4.9) ,涡旋混匀30 s，转移至2 mL离心管中，于4℃,10000 r/min离心5 min，将下层溶液转移至15 mL玻璃试管中，加入10 mL水，混匀，待净化。

7.1.2 牛奶和蜂蜜样品

称取试样1g(精确到0. 01g)，置于50 mL具螺旋盖聚丙烯离心管中，加入50 uL混合氘代内标添加溶液(4.14.6)，放置15 min，加入硅藻土3g(精确到0.1g) (4.7)研磨均匀，加入5 mL乙腈(4.1),涡旋混匀。室温超声提取5 min，其余按7.1.1相关步骤操作。

7.2 净化

将样品提取液转移至已活化的固相萃取C₁₈柱(4.11)中，控制流速不超过3 mL/min。依次用5 mL水、5 mL丙酮-水溶液(20+80)(4.8)和5 mL正己烷(4.2)淋洗柱子，淋洗液完全通过小柱后，抽干小柱，将已活化的固相萃取NH₂柱(4.12)串接到C₁₈柱下面，用6 mL乙腈(4.1)洗脱，流速不超过3 mL/min，收集洗脱液于15 mL玻璃试管中，氮气流吹干，加入1 mL乙腈-水(4.10)溶解残渣，涡旋，超声1 min，过0. 22 um滤膜，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

7.3 测定

7.3.1 液相色谱条件

液相色谱条件如下：

a)色谱柱：C₁₈柱，3 um,150 mm×2.1 mm(内径)，或相当者；

b)流动相：A：乙腈；B：0.1％甲酸水溶液；C:10 mmol 乙酸铵水溶液，梯度洗脱条件见表1;

表1 梯度洗脱程序表

c)流速：0.2mL/min;

d)柱温：35℃；

e)进样量：20uL。

7.3.2 质谱条件

质谱条件如下：

a)离子化模式：电喷雾；

b)扫描模式：正离子扫描；

c)检测方式：多反应监测(MRM) ;

d)分辨率：单位分辨率。

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文章来源：《食品化妆品检验卷无机元素和放射元素及其他检测方法》

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