5 仪器和设备

除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：

5.1 天平：感量为0.1mg。

5.2 pH计：精度≤0.02。

5.3 分光光度计。

5.4 涡旋混合器。

5.5 离心机：转速≥2000转/分钟。

5.6 恒温培养箱：30℃±1℃。

5.7 振荡培养箱：30℃±1℃,振荡速度140次/min～160次/min。

5.8 冰箱：2℃～5℃。

5.9 无菌吸管：10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器或吸头。

5.10 瓶口分液器：0mL～10mL。

5.11 锥形瓶：200mL。

5.12 容量瓶(A类)：100mL,250mL,500mL。

5.13 单刻度移液管(A类)：容量5mL。

5.14 漏斗：直径90mm。

5.15 定量滤纸：直径90mm。

5.16 试管：18mm×l80mm。

注：玻璃仪器使用前，用活性剂对硬玻璃测定管及其他必要的玻璃器皿进行清洗，清洗之后在200℃干热2h。

6 分析步骤

6.1 接种菌悬液的制备

6.1.1 菌种复苏

将菌株(4.1)活化后接种到麦芽浸粉琼脂斜面培养基(4.5.1)上，30℃±1℃培养16h～24h后，再转接2代〜3代来增强活力，制成贮备菌种，贮于冰箱(8.5)中，保存期不要超过2周。临用前接种到新的麦芽浸粉琼脂斜面培养基上。

6.1.2 接种菌悬液的制备

在使用的前一天将贮备菌种转接到新配制的麦芽浸粉琼脂斜面培养基上，于30℃±1℃培养16h～24h。用接种环刮取菌苔到一支灭菌氯化钠溶液(4.6)试管中。以2000转/分钟离心2min～3min,倾出上清液，加入10mL氯化钠溶液(4.6),振荡混匀，再离心2min～3min,如此清洗3次～4次。吸取一定量的该菌液移入装有10mL氯化钠溶液(4.6)的试管中，制成接种菌悬液。

用分光光度计，以氯化钠溶液(4.6)作空白，550nm波长下测定该接种菌悬液的透光率，调整加入的菌液量或者加入一定量的氯化钠溶液使该菌悬液透光率在60%～80%。

6.2 试样的处理

6.2.1 称取约含肌醇0.5mg～2.0mg的试样(精确至0.1mg)于250mL三角瓶中，对于干粉试样加入80mL盐酸(4.8),对于液体试样加入100mL盐酸(4.8),混匀，使干粉试样溶解。

6.2.2 将三角瓶以铝箔纸覆盖，在灭菌釜中125℃消化lh。取出，冷却至室温，加入约2mL氢氧化钠溶液(4.9),冷却。用氢氧化钠溶液(4.10)或盐酸溶液(4.7)调pH至5.2,转入250mL容量瓶中，定容至刻度。混匀，过滤，收集滤液，该滤液为待测液。调整稀释度，使待测液肌醇的浓度在1ug/mL～10ug/mL范围内。

6.3 标准曲线的制作

按表1顺序加入蒸镏水、肌醇标准工作液(4.11.3)和肌醇测定培养基(4.5.2)于培养管中，一式三份。

表1标准曲线的制作

6.4 待测液的制作

按表2顺序加入蒸镏水、待测液(6.2.2)和肌醇测定培养基(4.5.2)于培养管中，一式三份。

表2待测液的制作

相关链接：婴幼儿食品和乳品中肌醇的测定—微生物法（一）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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