9 原理

样品用水溶解，用亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白质。取上清液用丹磺酰氯衍生反应，衍生物经C₁₈反相色谱柱分离，用紫外检测器(波长254nm)或荧光检测器(激发波长330nm,发射波长530nm) 检测，外标法定量。

10 试剂和材料

除非另有规定，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

10.1 乙腈(CH₃CN):色谱纯。

10.2 冰乙酸(CH₃COOH)。

10.3 盐酸。

10.4 无水碳酸钠(Na₂CO₃)。

10.5 亚铁氰化钾［K₄Fe(CN)₆］。

10.6 乙酸锌［Zn(CH₃COO)₂］。

10.7 乙酸钠［Na(CH₃COO)］。

10.8 盐酸甲胺(甲胺盐酸盐)(CH₃NH₂•HC1)。

10.9 丹磺酰氯(5-二甲氨基萘-1-磺酰氯)：色谱纯。

注：丹磺酰氯对光和湿敏感不稳定。

10.10 牛磺酸标准品：纯度≥99%。

10.11 盐酸(1mol/L)：吸取9mL盐酸(10.3),用水稀释并定容到100mL。

10.12 沉淀剂

10.12.1 沉淀剂I:称取15.0g亚铁氧化钾(10.5),用水溶解并定容至100mL。该沉淀剂在室温下3个月内稳定。

10.12.2 沉淀剂II：称取30.0g乙酸锌(10.6),用水溶解并定容至100mL。该沉淀剂在室温下3个月内保持稳定。

10.13 碳酸钠缓冲液(pH9.5)(80mmol/L)：称取0.424g无水碳酸钠(10.4),加40mL水溶解，用1mol/L盐酸(10.11)调pH值至9.5,用水定容至50mL。该溶液在室温下3个月内稳定。

10.14 丹磺酰氯溶液(1.5mg/mL)：称取0.15g丹磺酰氯(10.9),用乙腈(10.1)溶解并定容至100mL。临使用前配制。

10.15 盐酸甲胺溶液(20mg/mL)：称取2.0g盐酸甲胺(10.8),用水溶解并定容至100mL。该溶液在4℃下3个月内稳定。

10.16 乙酸钠缓冲液(pH4.2)(10mmol/L)：称取0.820g乙酸钠(10.7),加800mL水溶解，用冰乙酸(10.2)调节pH至4.2,用水定容至1000mL,经0.45gm微孔滤膜过滤。

10.17 牛磺酸标准溶液

10.17.1 牛磺酸标准储备溶液(1mg/mL)：称取0.1000g牛磺酸标准品(10.10),用水溶解并定容至100mL。储备液在4℃下可保存7天。

10.17.2 牛磺酸标准工作液(紫外检测用)：将牛磺酸标准储备液(10.17.1)用水稀释制备一系列标准溶液，标准系列浓度为：0、5、10、15、20ug/mL。临用前配制。

10.17.3 牛磺酸标准工作液(荧光检测用)：将牛磺酸标准储备液(10.17.2)用水稀释制备一系列标准溶液，标准系列浓度为：0、0.5、0.10、0.15、0.20ug/mL。临用前配制。

相关链接：婴幼儿食品和乳品中牛磺酸的测定—0PA柱后衍生法（二）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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