11 仪器和设备

11.1 高效液相色谱仪，带紫外检测器或二极管阵列检测器或者荧光检测器。

11.2 pH计：精度为0.01。

11.3 涡旋混合器。

11.4 超声波振荡器。

11.5 离心机：转速≥5000转/分钟。

11.6 0.45um微孔滤膜。

11.7 天平：感量1mg,0.1mg。

12 操作步骤

12.1 试样的处理

12.1.1 试液提取

称取固体样品1g～5g,液体样品5g～30g试样(精确至0.01g,若用紫外检测器，试样中含牛磺酸宜在1ug以上，若用荧光检测器，试样中含牛磺酸宜在50ug以上)于100 mL容量瓶中，加入80mL温水(50℃～60℃)溶解，充分混匀，置超声波振荡器上振荡10min,冷却到室温。加1.0mL沉淀剂I(10.12.1),涡旋混合，1.0mL沉淀剂II (10.12.2),涡旋混合，用水定容至刻度，充分混匀，试液 于5000转/分钟下离心10 min,取上清液备用。上清液在4℃暗处保存放置24 h稳定。

12.1.2 试液衍生化

吸取1.00mL上述上清液到10mL具塞玻璃试管中，加入l.00mL碳酸钠缓冲液(10.13), 1.00mL丹磺酰氯溶液(10.14),充分混合，室温避光衍生反应2h(1h后需摇晃1次)，加入0.10mL盐酸甲胺溶液(10.15)涡旋混合，以终止反应，避光静置至沉淀完全。取上清液经0.45um微孔滤膜(11.6) 过滤，取滤液备用。衍生物在4℃可避光保存48 h。
另取1.00mL标准工作液(10.17.2),与试液同步进行衍生。

12.2 测定

12. 2.1 参考色谱条件

色谱柱：C₁₈反相色谱柱(粒径5 um, 250 mm×4.6mm)或同等性能色谱柱。

流动相：10mmol/L乙酸钠缓冲液(10.16)—乙腈(10.1)=70+30。

流速：1.00 mL/min。

柱温：室温。

检测波长：紫外检测器或二极管阵列检测器：254nm；

或荧光检测器：激发波长：330 nm；发射波长：530nm。

进样量：20 uL。

12.2.2 标准曲线绘制

将牛磺酸标准系列工作液(紫外检测用)(10.17.2)或牛磺酸标准系列工作液(荧光检测用)(10.17.3) 的衍生物依次按上述推荐色谱条件上机测定，记录色谱峰面积。以峰面积为纵坐标， 浓度为横坐标，绘制标准曲线。

12.2.3 试液测定

将试液衍生物按上述推荐色谱条件上机测定，从标准曲线中查得试液相应的浓度。

13 分析结果的表述

试样中牛磺酸的含量按式(2)计算：

式中：

X—试样中牛磺酸的含量，单位为毫克/100克(mg/100g)；

c—试液的进样浓度，单位为微克/毫升(ug/mL)；

V—试样定容体积，单位为毫升(mL);

m—试样质量，单位为克(g)。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。

14 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

15 其他

本标准的定量限为：当取样量为10.00g时,第一法0.5mg/100g ,第二法中紫外检测法为5 mg/100g,荧光检测法为0.1mg/100g。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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