12 分析步骤

12.1 试样消解

称取经粉碎混匀过40目筛的固体试样0.1g～0.5g (精确至0.001g)、半固体试样0.2g～1g(精确至0.001g)或液体试样1g～5g(精确至0.001g),移入干燥的100 mL或250mL定氮瓶中，加入0.1 g 硫酸铜、1g硫酸钾及5mL硫酸(10.3),匀后于瓶口放一小漏斗，将定氮瓶以45^o角斜支于有小孔的石棉网上。缓慢加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体 呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热半小时。取下放冷，慢慢加入20 mL水，放冷后移入50 mL或100 mL 容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。按同一方法做试剂空 白试验。

12.2 试样溶液的制备

吸取2.00mL～5.00mL试样或试剂空白消化液于50 mL或100 mL容量瓶内，加1滴～2滴对硝基苯酚指示剂溶液(10.12),摇匀后滴加氢氧化钠溶液(10.11)中和至黄色，再滴加乙酸溶液(10.13) 至溶液无色，用水稀释至刻度，混匀。

12.3标准曲线的绘制

吸取 0.00 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL 和 1.00mL 氨氮标准使 用溶液(相当于 0.00 ug、5.00 ug、10.0 ug、20.0 ug、40.0 ug、60.0 ug、80.0ug 和 100.0ug 氮)，分 别置于10mL比色管中。加4.0mL乙酸钠-乙酸缓冲溶液(10.15)及4.0mL显色剂(10.16),加水稀 释至刻度，混匀。置于100 ℃水浴中加热15 min。取岀用水冷却至室温后，移入1cm比色杯内，以零 管为参比，于波长400 nm处测量吸光度值，根据标准各点吸光度值绘制标准曲线或计算线性回归方程。

12.4 试样测定

吸取0.50 mL～2.00 mL (约相当于氮＜100ug)试样溶液和同量的试剂空白溶液，分别于10 mL比 色管中。以下按12.3自“加4 mL乙酸钠-乙酸缓酸溶液(pH 4.8)及4mL显色剂……”起操作。试样 吸光度值与标准曲线比较定量或代入线性回归方程求出含量。

13分析结果的表述

试样中蛋白质的含量按式(2)进行计算。

式中：

X—试样中蛋白质的含量，单位为克每百克(g/100g)；

c—试样测定液中氮的含量，单位为微克(ug);

c₀—试剂空白测定液中氮的含量，单位为微克(ug)；

V₁—试样消化液定容体积，单位为毫升(mL);

V₂—制备试样溶液的消化液体积，单位为毫升(mL)；

V₃—试样溶液总体积，单位为毫升(mL)；

V₄—测定用试样溶液体积，单位为毫升(mL)；

m—试样质量，单位为克(g);

F—氮换算为蛋白质的系数。一般食物为6.25；纯乳与纯乳制品为6.38；面粉为5.70；玉米、高粱为6.24；花生为5.46；大米为5.95；大豆及其粗加工制品为5.71；大豆蛋白制品为6.25；肉与肉制品为6.25；大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83；芝麻、向日葵为5.30；复合配方食品为6.25。

以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，蛋白质含量≥1g/100g时，结果保留三位有效数字；蛋白质含量＜1g/100g时，结果保留两位有效数字。

14 精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

相关链接：食品中蛋白质的测定—分光光度法（一）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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