6 分析步骤(所有操作均需避光进行)

6.1 试样制备

谷薯类、豆类、乳粉等试样需粉碎、研磨、过筛(筛板孔径0.3mm～0.5mm)；肉、蛋、坚果等用匀质器制成食糜;果蔬、半固体食品等试样需匀浆混匀;液体试样用前振摇混合。于4℃冰箱可保存1周。

6.2 试样提取

6.2.1 直接提取法

形态为颗粒、粉末、片剂、液体的营养素补充剂或强化剂、预混料；以饮料为基质或叶酸添加量>100μg/100g的食品可釆用直接提取法。准确称取固体试样0.1g～0.5g或液体试样0.5g～2g,精确至0.001g,转入100mL锥形瓶中，加入80mL氢氧化钠乙醇溶液,具塞,超声振荡2h～4h至试样完全溶解或分散,用水定容至刻度。

6.2.2 酶解提取法

谷薯类、肉蛋乳类、果蔬菌藻类、豆及坚果类等食品试样宜采用酶解提取法。

准确称取适量试样(约含0.2ug～2ug叶酸)，精确至0.001g。一般谷薯类、肉类、乳类、新鲜果蔬、菌藻类试样2g～5g;蛋类、豆、坚果类、内脏、干制试样0.2g～2g;流质或半流质试样5g～10g。转入100mL锥形瓶中，加30mL磷酸缓冲液，振摇5min后，具塞，于121℃(0.10MPa～0.12MPa)高压水解15min。

试样取出后冷却至室温,加入1mL鸡胰腺溶液;含有蛋白质、淀粉的试样需另加入1mL蛋白酶-淀粉酶液,混合。加入3滴～5滴甲苯后，置于37℃+1℃恒温培养箱内酶解16h～20h。取出，转入100mL容量瓶,加水定容至刻度，过滤。
另取一只锥形瓶，同试样操作，定容至100mL,过滤。作为酶空白液。

注：以谷物、乳粉等为基质的配方食品如需计量基质本底叶酸含量，可采用酶解法提取。

6.3 稀释

根据试样中叶酸含量用水对试样提取液进行适当稀释,使试样稀释液中叶酸含量在0.2ng/mL～0.6ng/mL范围内。

6.4 测定系列管制备

所用试管使用前洗刷干净,沸水浴30min,沥干后放入盐酸浸泡液中浸泡2h,经170℃±2℃烘干3h后使用。

6.4.1 试样和酶空白系列管

取3支试管,分别加入0.5mL、1.0mL、2.0mL试样稀释液(Vx)，补水至5.0mL。加入5.0mL叶酸测定用培养液,混匀。另取3支试管同法加入酶空白液。

6.4.2 标准系列管

取试管分别加入叶酸标准工作溶液0.00mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL、3.00mL、4.00mL和5.00mL,补水至5.00mL,相当于标准系列管中叶酸含量为0.00ng、0.05ng、0.10ng、0.20ng、0.30ng、0.40ng、0.50ng、0.60ng、0.80ng、1.00ng,再加入5.0mL叶酸测定用培养液,混匀。为保证标准曲线的线性关系，应制备2套～3套标准系列管,绘制标准曲线时，以每个标准点平均值计算。

相关链接：食品中叶酸的测定（二）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（一）》

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