6.1.5 选择性液体计数培养基的半定量测试方法

6.1.5.1 培养基的制备

将培养基分装试管，每管10mL。

6.1.5.2 工作菌悬液的制备

按照6.1.3.2中要求进行。

6.1.5.3 接种

6.1.5.3.1 目标菌的接种

在装有待测培养基的试管中接种10CFU～100CFU的目标菌，接种总量为1mL,同时接种两个平行管，混匀。同时将1mL菌悬液(与试管接种同一稀释度)倾注平板，接种两个平板，作接种量计数用。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。

6.1.5.3.2 非目标菌的接种

在装有待测培养基的试管中接种1000CFU-5000CFU的非目标菌，接种总量为1mL,同时接种两个平行管，混匀。同时将1mL菌悬液(比试管接种小10～100倍稀释度)倾注平板，接种两个平板，作接种量计数用。按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。

6.1.5.4 结果解释

用目测的浊度值(如0～2)评估培养基：

—0表示无混浊；

—1表示很轻微的混浊；

—2表示严重的混浊。

并记录小导管收集气体的体积比。

目标菌的浊度值应为2,产气应为1/3或以上；非目标菌的浊度值应为0或1,无产气现象。

注：有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团，沉积在试管或瓶子底部，发生这种情况时，小心振荡试管后再进行观察。

6.1.6 悬浮培养基和运输培养基的定量测试方法

6.1.6.1 培养基的制备

将培养基分装试管，每管10mL(有特殊要求的可选用5mL)。

6.1.6.2 目标菌工作菌悬液的制备

按照6.1.3.2中要求进行。

6.1.6.3 接种

在装有待测培养基的试管中接种100CFU～1000CFU的目标菌，同时接种两个平行管，混匀后，立即吸取1mL待测培养基混合液，选用相应的培养基倾注平板，每管待测培养基接种一个平板。按标准方法中规定的培养时间和温度培养后，进行菌落计数。

剩余己接种菌液的待测培养基置20℃～25℃放置45min后；再吸取ImL倾注平板，每管培养基接种一个平板，按标准方法中规定的培养时间和温度培养后，进行菌落计数。

6.1.6.4 结果观察与解释

待测培养基中的菌落数变化应在±50%内。

6.1.7 Mueller～Hinton血琼脂的纸片扩散测试方法(定性测试方法)

6.1.7.1 平板的制备与保存

倾注融化的培养基到平皿中，使之在平皿中形成一个厚度为4mm～5mm的琼脂层。倾注后将平板放到水平平面，使琼脂冷却凝固。凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和(或)5℃±3℃冰箱的密封袋中，在有效期内使用。使用前应可将平板置35℃温箱中或置室温层流橱中对琼脂表面进行干燥，培养基表面应湿润，但不能有水滴，培养皿也不应有水滴。

6.1.7.2 质控菌株的复苏

将质控菌株接种到血平板上，按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。检查纯度合格后，用于质控工作菌悬液的制备。

6.1.7.3 质控菌工作菌悬液的制备

将纯度满意的质控菌株培养物悬浮于TSB肉汤中，并调整浊度为0.5麦氏标准(1×10⁸CFU/mL～2×10⁸CFU/mL)。

6.1.7.4 接种

用涂布法将质控工作菌悬液接种于MH平板上，并贴上相应的抗生素纸片(每平板最多贴6片)，将平板翻转后按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。调整菌悬液浊度与接种所有平板间的时间间隔不要超过15min。

6.1.7.5 结果观察与解释

在无反射黑色背景下，观察有无抑菌环。

相关链接：食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求（八）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

版权与免责声明：转载目的在于传递更多信息。

如其他媒体、网站或个人从本网下载使用，必须保留本网注明的"稿件来源"，并自负版权等法律责任。

如涉及作品内容、版权等问题，请在作品发表之日起两周内与本网联系，否则视为放弃相关权利。