4.3 几种常用的急性毒性试验设计方法

4.3.1 霍恩氏(Horn)法

4.3.1.1 预试验

根据受试物的性质和已知资料,选用下述方法：一般多采用100mg/kg体重，1000mg/kg体重和10000mg/kg体重的剂量,各以2只～3只动物预试。根据24h内死亡情况,估计LD₅₀的可能范围，确定正式试验的剂量组。也可简单地直接采用一个剂量，如215mg/kg体重,用5只动物预试。观察2h内动物的中毒表现。如中毒体征严重,估计多数动物可能死亡，即可采用低于215mg/kg体重的剂量系列进入正式试验;反之中毒体征较轻,则可采用高于此剂量的剂量系列。如有相应的文献资料时可不进行预试。

4.3.1.2 正式试验

4.3.1.2.1 动物数

一般每组10只动物,雌雄各半。

4.3.1.2.2 常用剂量系列

因为剂量间距较为小，所以结果较为精确。一般试验时，可根据上述剂量系列设计5个组，即较原来的方法在最低剂量组以下或最高剂量组以上各增设一组，这样在查表时容易得出结果。

4.3.1.2.3 观察

观察期内记录动物死亡数、死亡时间及中毒表现等,根据每组死亡动物数和所采用的剂量系列，查表求得LD₅₀。

4.3.2 限量法(Iiinit test)

4.3.2.1 适用范围

该方法适用于有关资料显示毒性极小的或未显示毒性的受试物,给予动物一定剂量的受试物,仍不出现死亡。

4.3.2.2 动物数

一般选20只动物,雌雄各半。

4.3.2.3 剂量

一般选用剂量至少应为10.0g/kg体重，如剂量达不到10.0g/kg体重，则给予动物最大剂量(最大使用浓度和最大灌胃体积)。

4.3.2.4 观察

给予受试物后，观察期内无动物死亡,则认为受试物对某种动物的经口急性毒性耐受剂量大于某一数值,其LD₅₀大于该数值。如果动物出现死亡应选择其他方法。

4.3.3 上-下法(up-down procedure,UDP)

4.3.3.1 适用范围

该方法主要适用于纯度较高、毒性较大、摄入量小且在给予受试物后动物1d～2d内死亡的受试物,对预期给予受试物后动物在5d及以后死亡的受试物不适用。可按照试验者选择的剂量序列或在专用软件包指导下进行试验,并对试验结果进行统计。

4.3.3.2 上-下法限量试验

以2000mg/kg体重剂量先给1只动物受试物，如果动物在48h内死亡,应进行正式试验。如果动物在48h内存活，另取4只动物以相同的剂量给予受试物，如5只动物中有3只死亡,应进行正式试验;如3只及以上的动物存活，结束试验,则该受试物LD₅₀>2000mg/kg体重。

如需要采用5000mg/kg体重剂量时，给1只动物受试物，如动物在48h内死亡，应进行正式试验。如在48h内动物存活，另取2只动物,仍以相同剂量给予受试物,如在14d的观察期内动物全部存活,结束试验,则该受试物LD₅₀>5000mg/kg体重;如果14d的观察期内后2只动物中有1只或2只死亡,再追加2只动物，给予受试物后在14d观察期内5只动物中3只及以上动物存活，结束试验，该受试物LD₅₀>5000mg/kg；如5只动物中3只及以上动物分别在14d观察期内死亡，应进行正式试验。

相关链接：急性经口毒性试验（一）

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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