4.3.5.6 计算标准误

标准误计算见式(8)：

式中：

SE—标准误；

2S—LD₈₄与LD₁₆之差，即2S=LD₈₄-LD₁₆(或ED₈₄-ED₁₆)；

N'—概率单位3.5～6.5之间(反应百分率为6.7%～93.7%)各组动物数之和。

注：相当于LD₈₄及LD₁₆的剂量均可从所作直线上找到。也可用普通方格纸作图，查表将剂量换算成对数值,将死亡率换算成概率单位,方格纸横坐标为剂量对数,纵坐标为概率单位,根据剂量对数及概率单位作点连成线，由概率单位5处作一水平线与直线相交，由相交点向横坐标作一垂直线，在横坐标上的相交点即为剂量对数值,求反对数LD₅₀值。

4.3.6 急性联合毒性试验

4.3.6.1 原理

两种或两种以上的受试物同时存在时，可能发生拮抗、相加或协同三种不同的联合作用方式，可以根据一定的公式计算和判定标准来确定这三种不同的作用。

4.3.6.2 步骤

4.3.6.2.1 分别测定单个受试物的LD₅₀，方法同4.3.1、4.3.2、4.3.3、4.3.4、4.3.5。

4.3.6.2.2 按各受试物的LD₅₀。值的比例配制等毒性的混合受试物。

4.3.6.2.3 测定混合物的LD₅₀,用其他LD₅₀测定方法时,可以按各个受试物的LD₅₀值的二分之一之和作为中组,然后按等比级数向上、下推算几组,与单个受试物LD₅₀测定的设计相同，如估计是相加作用,可向上、下各推算两组;如可能为协同作用,则可向下多设几组;如可能为拮抗作用,则可向上多设几组。

4.3.6.3 计算

4.3.6.3.1 混合物中各个受试物是以等毒比例混合的，因此求出的LD₅₀乘以各受试物的比例，即可求得各受试物的剂量。

4.3.6.3.2 用式(9)计算混合物的预期LD₅₀值的比值,按比值判定作用的方式。

式中：

a、b∙∙∙n—A、B∙∙∙N各受试物在混合物中所占的质量比例,a+b+∙∙∙+n=1。

4.3.6.3.3 判定受试物联合作用方式的比值采用Keplinger的规定，即小于0.57为拮抗作用，0.57～1.75为相加作用，大于1.75为协同作用。

4.4 观察指标

4.4.1 临床观察

观察包括皮肤、被毛、眼、黏膜以及呼吸系统、泌尿生殖系统、消化系统和神经系统等,特别要注意观察有无震颤、惊厥、流涎、腹泻、呆滞、嗜睡和昏迷等。在试验开始和结束时称取并记录动物体重,并且在观察期每周至少称取动物体重1次。全面观察并记录动物变化发生的时间、程度和持续时间,评估可能的毒作用靶器官。如发现动物处于濒死或表现出严重的疼痛和持续的痛苦状态应处死动物。死亡时间记录应当尽可能精确。

4.4.2 病理学检查

所有的动物包括试验期间死亡、人道处死和试验结束处死的动物都要进行大体解剖检查,记录每只动物大体病理学变化，出现大体解剖病理改变时应做病理组织学观察。

5 数据处理和结果评价

描述由中毒表现初步提示的毒作用特征,根据LD₅₀值确定受试物的急性毒性分级。

6 报告

6.1 试验名称、试验单位名称和联系方式、报告编号。

6.2 试验委托单位名称和联系方式、样品受理日期。

6.3 试验开始和结束日期、试验项目负责人、试验单位技术负责人、签发日期。

6.4 试验摘要。

6.5 受试物:名称、批号、剂型、状态(包括感官、性状、包装完整性、标识)、数量、前处理方法、溶媒。

6.6 实验动物:物种、品系、级别、数量、体重、性别、来源(供应商名称、实验动物生产许可证号)、动物检疫、适应情况,饲养环境(温度、相对湿度、实验动物设施使用许可证号)，饲料来源(供应商、实验动物饲料生产许可证号)。

6.7 试验方法:试验分组、每组动物数、剂量选择依据、受试物给予途径及期限、观察指标、统计学方法。

6.8 试验结果:动物生长活动情况、体重、体重增长、每只动物的反应(包括动物的毒性体征、严重程度、持续时间、是否可逆的)、死亡率列表、每只动物大体解剖、病理组织学所见、LD₅₀和95%可信限，给出结果的统计处理方法。

6.9 试验结论:受试物经口急性毒性的特点、可逆性、可能的靶器官、LD₅₀和95%可信限以及急性经口毒性分级。

7 试验的解释

急性经口毒性试验可提供在短时间内经口接触受试物所产生的健康危害信息，为进一步毒性试验的剂量选择提供依据,并初步估测毒作用的靶器官和可能的毒作用机制。但曲于动物和人存在种属差异,故试验结果外推到人存在一定的局限性。

文章来源：《食品安全国家标准汇编检验方法（二）》

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