A.7 副染料的测定

A.7.1 方法提要

用纸上层析法将各组分分离，洗脱，然后用分光光度法定量。

A.7.2 试剂和材料

A.7.2.1 无水乙醇。

A.7.2.2 正丁醇。

A.7.2.3 丙酮溶液：1+1。

A.7.2.4 氨水溶液：4+96。

A.7.2.5 碳酸氢钠溶液：4g/L。

A.7.2.6 氢氧化钠溶液：100g/L。

A.7.3 仪器和设备

A.7.3.1 分光光度计。

A.7.3.2 层析滤纸：1号中速，150mm×250mm。

A.7.3.3 层析缸：φ240mm×300mm。

A.7.3.4 微量进样器：100uL。

A.7.3.5 纳氏比色管：50mL有玻璃磨口塞。

A.7.3.6 玻璃砂芯漏斗：G3,孔径为15um～40um。

A.7.3.7 50mm比色皿。

A.7.3.8 10mm比色皿。

A.7.4 分析步骤

A.7.4.1 纸上层析条件

A.7.4.1.1 展开剂：正丁醇+无水乙醇+氨水溶液=6+2+3。

A.7.4.1.2 温度：20℃～25℃。

A.7.4.2 试样溶液的配制

称取2g试样(精确至0.001g)。置于烧杯中，加入适量水和50mL氢氧化钠溶液，加热溶解后，移入100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀备用，该试样溶液浓度为2%。

A.7.4.3 试样洗出液的制备

用微量进样器吸取100uL试样溶液，均匀地点注在离滤纸底边25mm的一条基线上，成一直线,使其在滤纸上的宽度不超过5mm,长度为130mm,用吹风机吹干。将滤纸放入装有预先配制好展开剂的层析缸中展开，滤纸底边浸入展开剂液面下10mm,待展开剂前沿线上升至150mm或直到副染料分离满意为止。取出层析滤纸，用冷风吹干。

用空白滤纸在相同条件下展开，该空白滤纸应与上述步骤展开用的滤纸在同一张滤纸上相邻部位裁取。

副染料纸上层析示意图见图A.1。

将展开后取得的各个副染料和在空白滤纸上与各副染料相对应的部位的滤纸按同样大小剪下，并剪成约5mm×15mm的细条,分别置于50mL的纳氏比色管中,准确加入丙酮溶液5mL,摇动3min～5min后,再准确加入20mL碳酸氢钠溶液，充分摇动，然后分别在G3玻璃砂芯漏斗中自然过滤,滤液应澄清，无悬浮物。分别得到各副染料和空白的洗出液。在各自副染料的最大吸收波长处，用50mm比色皿，将各副染料的洗出液在分光光度计上测定各自的吸光度值。

在分光光度计上测定吸光度值时，以5mL丙酮溶液和20mL碳酸氢钠溶液的混合液作参比液。

A.7.4.4 标准溶液的配制

吸取6mL 2%的试样溶液移入100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，该溶液为标准溶液。

A.7.4.5 标准洗出液的制备

用微量进样器吸取100uL标准溶液，均匀地点注在离滤纸底边25mm的一条基线上，用吹风机吹干。将滤纸放入装有预先配制好展开剂的层析缸中展开，待展开剂前沿线上升40mm,取出用冷风吹干，剪下所有展开的染料部分，按A.7.4.3方法进行萃取操作，得到标准洗出液。用10mm比色皿在最大吸收波长处测吸光度值。

同时用空白滤纸在相同条件下展开，按相同方法操作后测洗出液的吸光度值。

图A.1 副染料纸上层析示意图

A.7.4.6 结果计算

副染料以质量分数w4计，数值用％表示，按公式(A.4)计算:

式中：

A1...An—各副染料洗出液以50mm光径长度测定出的吸光度值；

b1...bn—各副染料对照空白洗出液以50mm光径长度测定出的吸光度值；

As—标准洗出液以10mm光径长度测定出的吸光度值；

bs—标准对照空白洗出液以10mm光径长度测定出的吸光度值；

5—折算成以10mm光径长度的比数；

100/6—标准洗出液折算成2%试样溶液的比数；

S—试样的质量分数％。

计算结果表示到小数点后1位。

平行测定结果的绝对差值不大于0.2%(质量分数)，取其算术平均值作为测定结果。

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文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(一)》

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