A.5 淀粉试验

A.5.1 试剂和材料

碘溶液：称取碘14.0g，溶于含有碘化钾36.0g的100mL水溶液中，加入3滴盐酸，加水稀释至1000mL。

A.5.2 分析步骤

称取试样1.0g，分散于10mL水中。加入碘溶液，无蓝色出现，即为通过试验。

A.6 蒽醌的测定

A.6.1 方法提要

用乙腈提取试样中的蒽醌，通过高效液相色谱法进行测定。

注：试样和对照品应避光保存。

A.6.2 试剂和材料

A.6.2.1 蒽醌对照品：大黄素(EMO)(纯度≥90%)、芦荟大黄素(AEM)(纯度≥95%)和大黄素甲醚(PHY)(纯度≥98.0%)，或者1,8-二羟基-3-甲氧基-6-甲基-蒽醌、大黄酸(RHE)(纯度≥95%)和大黄根酸(CHR)(纯度≥98%)。

A.6.2.2 内标对照品：1,8-二羟基蒽醌(纯度≥96%)。

A.6.2.3 甲醇：色谱纯。

A.6.2.4 乙腈：色谱纯。

A.6.2.5 三氟乙酸。

A.6.2.6 碳酸氢钠溶液：2g/L。

A.6.2.7 乙腈/碳酸氢钠溶液：乙腈和碳酸氢钠溶液的体积比为60：40。

A.6.2.8 缓冲溶液：pH9.0。

A.6.3 仪器和设备

高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器(波长435nm)。

A.6.4 参考色谱条件

A.6.4.1 色谱柱：C₁₈色谱柱，250mm×4.6mm，粒度5um。或其他等同分离效果的色谱柱和色谱条件。

A.6.4.2 流动相：A+B；A为0.1%三氟乙酸溶液，B为乙腈。

A.6.4.3 运行时间：60min。

A.6.4.4 梯度：见表A.1。

表A.1 流动相的浓度配比

A.6.4.5 流速：1mL/min。

A.6.4.6 进样量：50uL。

A.6.5 分析步骤

A.6.5.1 标准贮备溶液(100mg/L)的制备

称取3种蒽醌对照品和内标对照品各1mg+0.01mg，分别用约5mL甲醇将对照品分别转移至10mL的容量瓶中，超声处理15min后，加甲醇稀释至刻度。

此4份标准贮备溶液在4℃下贮存于棕色瓶中(此条件下溶液可稳定2周)。

A.6.5.2 混合标准溶液(10mg/L)的制备

3份蒽醌标准贮备溶液各吸取lmL，置于一个10mL的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。

A.6.5.3 标准工作溶液的制备

取5个10mL的容量瓶，分别加入5mL、2mL、1mL、0.5mL和0mL混合标准溶液，再分别加入1mL内标标准贮备溶液，混合后，分别加甲醇稀释至刻度。

A.6.5.4 试样溶液的制备

称取约0.4g试样，精确至0.01g，置于一个50mL圆底烧瓶中。加入20mL三氟乙酸，在70℃下加热回流4h。将试样冷却至室温，并用旋转蒸发器蒸发至干。加入3mL乙腈/碳酸氢钠溶液，超声处理30min。将溶液转移至一个离心管中，在5000r/min下离心30min。用事先经pH9.0的缓冲溶液中和过的萃取柱(Merck，NT1或其他等效柱)过滤上清液。吸取900uL过滤后的试样溶液，置于一个2.5mL的小瓶中，加入100uL内标标准贮备溶液，充分混匀。

A.6.5.5 标准曲线的绘制

在A.6.4参考色谱条件下，分别对各个标准工作溶液和内标标准贮备溶液进行色谱分析，记录色谱图中各蒽醌及内标的峰面积。以各蒽醌与内标的峰面积比值对各个标准工作溶液浓度(mg/L)作标准曲线。

A.6.5.6 测定

在A.6.4参考色谱条件下，分别对试样溶液和内标标准贮备溶液进行色谱分析，记录色谱图中各蒽醌及内标的峰面积。计算各蒽醌与内标的峰面积比值，根据标准曲线，得到各蒽醌的浓度。

A.6.6 结果计算

各蒽醌的含量w₇以毫克每千克(mg/kg)计，按式(A.3)计算：

式中：

c——根据标准曲线得到的试样溶液中各蒽醌的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；

3——试样溶液的体积，单位为毫升(mL)；

1000——质量换算系数；

1000——体积换算系数；

0.9——取样体积，单位为毫升(mL)；

m₅——试样的质量，单位为克(g)。

由式(A.3)计算得到的各蒽醌的含量之和即为试样中蒽醌的含量。

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(四)》

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