薄层色谱(TLC)是最经典的色谱技术之一。虽然气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)的分离效果好、结果可靠、准确性高，并且已成为药典分析方法中应用增长最快的色谱技术，但TLC能够提供图像用以直接观测并记录色谱结果，且良好的灵活性、分析时间短、费用低等优点，仍是中药检验中最常用的分析、鉴别手段。在药品快速检验以及真伪鉴别检验中，更以其良好的专属性，优于其他理化方法。

一、薄层色谱法的特点

薄层色谱法具有设备简单、操作方便、分离速度快等优点，从而发展很快，并在中药的定性定量分析中得到了广泛应用。

薄层色谱法是一项离线色谱技术，操作步骤相对独立(包括点样、展开、显色、照相、检测和计算等)，按照时间和位置分割，这就提供了非常广的灵活性。薄层色谱可以同时分离、分析多个样品，并且与对照品在完全一致的条件下分离，直观可比性强。展开后的色谱保存在薄层板上，可用多种方法检视，得到多方面的信息。另一方面，TLC是一个开放系统，结果受到许多因素影响，例如实验室中的温度、湿度、光线等，而实际操作中多种参数的标准化又有较大的难度，包括薄层固定相的类型和活性、展开缸的立体结构、饱和程度、点样体积和展开溶剂的比例等。

现代薄层色谱方法与经典薄层色谱相比，技术方法已经有了很大的改观，主要表现在：

(一)高效性

高效薄层色谱法(HPTLC)因采用了粒度更小、分布更窄的固定相，色谱的分离能力更强，并产生一系列的相关变化，如表7-1所示。

表7-1 TLC与HPTLC的比较

(二) 仪器化

除20世纪80年代出现的用于定量测定的薄层扫描仪外，现用于薄层点样、展开、显色、成像的设备已在很多实验室广泛使用。可以进行半自动、全自动点样，自动展开，自动浸板显色，数码成像等系列化的操作，大大提高了薄层色谱操作的仪器化水平。

(三) 规范化

以仪器化为基础，2015年版《中国药典》四部薄层色谱法(通则0502)详细规定了检验用薄层板的种类，点样、展开、显色、检视及色谱记录的方法，并规定了薄层色谱的系统适用性试验方法，以及薄层扫描法定量测定、计算的详细内容，为药品检验中的规范化操作提供了有效的保证。

二、 薄层色谱法的基本原理

薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力的不同，使在移动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。

薄层层析可根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。一般实验中应用较多的是以吸附剂为固定相的薄层吸附层析。

三、 常用仪器与材料

1. 薄层板按支持物的材质分为玻璃板、塑料板或铝板等；按固定相种类分为硅胶薄层板、键合硅胶板、微晶纤维素薄层板、聚酰胺薄层板、氧化铝薄层板等。固定相中可加入黏合剂、荧光剂。硅胶薄层板常用的有硅胶G、硅胶GF₂₅₄、硅胶H、硅胶HF₂₅₄，G、H表示含或不含石膏黏合剂。F₂₅₄为在紫外光254nm波长下显绿色背景的荧光剂。按固定相粒径大小分为普通薄层板(10～40um)和高效薄层板(5～10um)。

在保证色谱质量的前提下，如需对薄层板进行特别处理和化学改性以适应分离的要求，可用实验室自制的薄层板；固定相颗粒大小一般要求粒径为10～40um；玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠。

2. 点样器一般采用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。

3. 展开容器上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。水平展开用专用的水平展开槽。

4. 显色装置喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。

5. 检视装置为装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用。暗箱内光源应有足够的光照度。

6. 薄层色谱扫描仪系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。

文章来源：《食品安全国家标准汇编食品添加剂(五)》

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