(四) 测定法

1. 标准曲线法在仪器推荐的浓度范围内，除另有规定外，制备含待测元素不同浓度的对照品溶液至少5份，浓度依次递增，并分别加入各品种项下制备供试品溶液的相应试剂，同时以相应试剂制备空白对照溶液。将仪器按规定启动后，依次测定空白对照溶液和各浓度对照品溶液的吸光度，记录读数。以每一浓度3次吸光度读数的平均值为纵坐标、相应浓度为横坐标，绘制标准曲线。按各品种项下的规定制备供试品溶液，使待测元素的估计浓度在标准曲线浓度范围内，测定吸光度，取3次读数的平均值，从标准曲线上查得相应的浓度，计算被测元素含量。绘制标准曲线时，一般采用线性回归，也可采用非线性拟合方法回归。

(1) 标准曲线溶液的制备

1) 铅的标准曲线：分别精密量取铅标准储备液(1ug/ml)适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml分别含铅0、5、20、40、60、80ng的溶液。

2) 镉的标准曲线：分别精密量取镉标准储备液(1ug/ml)适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml分别含镉0、0.8、2.0、4.0、6.0、8.0ng的溶液。

3) 铜的标准曲线：分别精密量取铜标准储备液(10ug/ml)适量，用2%硝酸溶液制成每1ml分别含铜0、0.05、0.2、0.4、0.6、0.8ug的溶液。

4) 砷的标准曲线：分别精密量取砷标准储备液(1ug/ml)适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml分别含砷0、5、10、20、30、40ng的溶液。

5) 汞的标准曲线：分别精密量取汞标准储备液(1ug/ml)0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml，置50ml量瓶中，加20%硫酸溶液5ml，5%高锰酸钾溶液0.5ml，摇匀，滴加5%盐酸羟胺溶液至紫红色恰消失，用水稀释至刻度，摇匀，即得。

(2) 测定

1) 铅测定法：铅的测定采用石墨炉原子吸收法。因中药中的复杂机体成分易产生干扰，所以多数情况下有必要使用基质改进剂。
取对照品溶液、空白溶液及供试品溶液各10ul，分别加入含1%磷酸二氢铵溶液和0.2%硝酸镁溶液的混合溶液5ul作为基质改进剂，混匀，注入石墨管，测定。采用氘灯法或塞曼法进行背景校正。检测波长一般选择283.3nm，其他检测参数可根据仪器具体情况加以优化调整。如采用M6型原子吸收分光光度计时，可参考以下测定条件：采用热解涂层石墨管，塞曼法背景校正，空心阴极灯工作电流为9mA，狭缝为0.5nm，原子化程序为：干燥温度110℃，持续20秒；灰化温度900℃，持续15秒；原子化温度1600℃，持续3秒；清除温度2200℃，持续2秒。

2) 镉测定法：镉的测定采用石墨炉原子吸收法。取对照品溶液、空白溶液及供试品溶液各10ul，注入石墨管，测定，是否需要采用基质改进剂，应根据待测样品的不同种类，依据采用标准加人法后的预实验结果确定。可根据仪器配置情况选择氘灯法或塞曼法进行背景校正。检测波长一般选择228.8nm，其他检测参数可根据仪器具体情况加以优化调整。如采用M6型原子吸收分光光度计，加入基质改进剂时，可参考以下测定条件：采用热解涂层石墨管，塞曼法背景校正，空心阴极灯工作电流4mA为，狭缝为0.5nm，进样量20ul，原子化程序为：干燥温度110℃，持续20秒；灰化温度800℃，持续15秒；原子化温度1300℃，持续3秒；清除温度2100℃，持续2秒。

3) 铜测定法：铜的测定采用火焰原子吸收法。检测波长324.7nm，采用空气-乙炔火焰，若使用M6型原子吸收分光光度计时，可参考以下测定条件：燃气流量0.9L/min，四线A灯背景校正，空心阴极灯工作电流为4mA，狭缝为0.5nm。

4) 砷测定法：砷的测定采用氢化物发生原子吸收法。分别精密量取各浓度对照品溶液、空白对照溶液及供试品溶液各10ml，分别加25%碘化钾溶液1ml，摇匀，加10%抗坏血酸溶液1ml，摇匀，用盐酸溶液(20→100)稀释至25ml，摇匀，密塞，置80℃水浴中加热3分钟，取出，放冷。取适量，吸入氢化物发生装置，以含1%硼氢化钠和0.3%氢氧化钠混合溶液作为还原剂，1%盐酸溶液为载液，氮气为载气，吸收管温度为800～900℃，检测波长为193.7nm，背景校正为氘灯或塞曼效应，测定吸收值。反应时间、进样体积(时间)、载气流量等参数，可参照氢化物发生器生产厂家推荐的条件，结合原子吸收分光光度计测定条件加以优化后确定：

5) 汞测定法：汞的测定采用冷蒸气原子吸收法。当采用冷原子吸收法时，由于其测定的灵敏度较低，需取样品重新消解，取消解液，加20%硫酸溶液1ml，5%高锰酸钾溶液0.1ml，摇匀，滴加5%盐酸羟胺溶液至紫红色恰好消失，用水稀释至10ml，摇匀，吸入氢化物装置测定。所采用的冷蒸气发生装置与As测定所采用的氢化物装置相同，因Hg在室温下即可原子化，所以测定Hg时吸收管不需加热。以0.2%硼氢化钠和0.1%氢氧化钠混合溶液作为还原剂，1%盐酸溶液为载液，氮气为载气，检测波长为253.6nm，氘灯或塞曼法背景校正。其他测定参数可根据仪器具体条件加以优化后确定。

2. 标准加入法取同体积按各品种项下规定制备的供试品溶液4份，分别置4个同体积的量瓶中，除(1)号量瓶外，其他量瓶分别精密加入不同浓度的待测元素对照品溶液，分别用去离子水稀释至刻度，制成从零开始递增的一系列溶液。按上述标准曲线法自“将仪器按规定启动后”操作，测定吸光度，记录读数；将吸光度读数与相应的待测元素加入量作图，延长此直线至与含量轴的延长线相交，此交点与原点间的距离即相当于供试品溶液取用量中待测元素的含量(如图13-7)，再以此计算供试品中待测元素的含量。

当用于杂质限量检查时，取供试品、按各品种项下的规定，制备供试品溶液；另取等量的供试品，加入限度量的待测元素溶液.制成对照品溶液。照上述标准曲线法操作，设对照品溶液的读数为a，供试品溶液的读数为b，b值应小于(a-b)。

图13-7标准加入法测定图示

(五) 注意事项

1. 石墨炉法测定铅、镉注意事项

(1) 采用石墨炉法时，建议使用自动进样器以保证进样精密度。

(2) 关于基质改进剂。基质改进剂一般是指往石墨炉或样品溶液中加入一种或几种化学物质，使基质形成易挥发的化合物，在原子化阶段之前驱除掉；或者降低待测元素的挥发性，以防止灰化过程中的损失。建议在铅、镉的测定中使用药典推荐的基质改进剂，有助于排除供试品溶液中的复杂基质对测定产生的干扰。由于氯化铅挥发性强，故当采用湿法消解，使用了高氯酸、盐酸等，使供试品溶液中含有一定的氯离子时，必须使用基质改进剂，以防止灰化阶段铅的挥发损失。例如，当样品中含氯，而未采用基质改进剂时，灰化温度高于300℃时铅就产生挥发损失，而采用药典推荐的基质改进剂后，灰化温度可提高到1000℃，较高的灰化温度可有效促进基质成分的分解与排除，减少了原子化过程中对测定的干扰。

(3) 优化石墨炉灰化-原子化条件。药典列出的测定条件为参考条件，不同的仪器、针对不同的样品，一些测定条件可能会有变化，一般应绘制灰化-原子化曲线，确定最高灰化温度与最低原子化温度，以最大程度排除干扰，同时获得最高的灵敏度。

(4) 采用适宜的背景校正。背景校正是石墨炉分析中排除背景分子光谱干扰的重要手段。不同厂家的仪器具有的背景校正方式可能不同，一般氘灯法和塞曼法最为常用。尔灯法校正能力强，但由于需引入第二光源，因此必须注意光路的准直；塞曼法不需第二光源，使用方便，结果准确，但仪器购置成本略高，灵敏度较氘灯法略低。

2. 火焰法测定铜的注意事项铜方便采用火焰法进行测量，干扰小，精密度好，结果准确。应注意调节乙炔-空气燃气比及燃烧头高度，以便获得最佳灵敏度。

3. 氢化物法测定砷、汞的注意事项

(1) 溶液酸度对测定灵敏度有较大影响，应保持对照液、供试液、空白液酸度一致。

(2) 汞稳定性较差，加入氧化剂可增强汞的稳定性，但仍然建议溶液制备后尽快完成测定。

(3) 硼氢化钠(或硼氢化钾)溶液稳定性较差，需临用新制。

(4) 砷、汞毒性强，测定时需加强排风，保证安全。

(六)标准曲线与线性范围

制备标准曲线时，一般采用一元线性回归，但在测定线性范围较窄的情况下，采用二次方程最小二乘法拟和回归更能反映真实的浓度-吸收度关系。一般要求r≥0.995。样品测定值，应在标准曲线线性范围之内，若其吸收值高于标准曲线，则应适当稀释后再行测定。

相关链接：中药中铅、镉、砷、汞、铜残留量测定法（二）

文章来源：《实用中药药品检验检测技术指南》

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