[检测原理]

根据三聚氰胺的结构特点，采用茜素红与三聚氰胺反应，通过紫外分光光度法，测定反应物的吸光度，从而快速检测乳制品中三聚氰胺的残留。

[材料与仪器]

三聚氰胺(分析纯)；乙腈(分析纯)；茜素红(分析纯)；供试乳粉；实验用水均为纯水。紫外：可见分光光度计；电子分析天平。

[实验方法]

(1)实验溶液的配制茜素红溶液的配制：精确称取一定质量的茜素红溶于纯水(pH值为7.0)，容量瓶定容至100mL，混匀后备用。配制所需各质量浓度(g/mL)茜素红溶液。

三聚氰胺溶液的配制：称取.0.1g三聚氰胺标准品溶于20mL热水，定容至100mL，备用。

(2)受试样品的预处理称取25ug三聚氰胺标准品同1g乳粉混合，溶于25mL热水，冷却后添加75mL乙腈，室温放置30min。待样品中的蛋白充分沉淀后，除去沉淀，500r/min震荡提取10min，2000r/min离心5min，上清液作为测试样品备用。

(3)最佳检测波长的选择取5mL样品(三聚氰胺含量为25ug/mL)同0.1g/L茜素红显色液2mL混合，室温反应10min。用紫外可见分光光度计，以纯水为对照，在200~400nm范围内，分别对反应络合物、0.01%茜素红溶液及三聚氰胺标准溶液进行光谱扫描，确定最佳检测波长。

(4)最佳显色剂浓度的选择取5mL样品与不同浓度(0.01、0.02、0.04、0.08、0.16、0.32g/L)茜素红溶液2mL混合，室温反应10min。用紫外可见分光光度计，以纯水为对照，在最佳吸收波长处测定吸光度，确定茜素红溶液的最佳浓度。

(5)最伟显色时间的选择取5mL样品与最佳浓度的茜素红溶液2mL混合，室温下分别反应0、10、20、30、40、50、60min。以纯水为对照，在最佳吸收波长处测定吸光度，确定最佳显色时间。

(6)最佳显色温度的选择取5mL样品与最佳浓度茜素红溶液2mL混合，分别在25℃、35℃、45℃、55℃、65℃条件下反应210min。以纯水为对照，在最佳吸收波长处测定吸光度，确定最佳显色温度。

(7)标准曲线的绘制按(2)所述配制三聚氰胺含量分别为10、20、30、40、50ug/mL的样品，各取5mL分别同2mL最佳浓度茜素红溶液在最佳显色条件下反应。以纯水为对照，在最佳吸收波长处测定反应络合物吸光度；以吸光度为纵轴，三聚氰胺含量为横轴做图，绘制检测标准曲线，并进行回归分析。

[结果分析]

对检测结果进行统计，对不同乳粉中三聚氰胺含量作出分析。

相关链接：乳制品中三聚氰胺的快速检测(试剂盒法)

文章来源：《食品快速检测实训教程》

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