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三、体细胞检测新方法的研究
(一)利用牛乳的电导率测定牛乳的体细胞
患有乳腺炎的奶牛产的牛乳成分会发生变化,其中钾离子和乳糖含量会降低,氯离子和钠离子会增加;乳腺炎情况越厉害体细胞数越多,乳成分变化越大,这会引起牛乳电导率的改变。牛乳的电导率作为反快乳腺炎的指标早在19世纪40年代就被提出。到现在,电导率已经单独作为监测牛乳乳腺炎的一种手段。但是体细胞数(SCC)和电导率之间的相关性却比较差,主要是因为影响乳成分的因素有很多,如乳牛生理状况、年龄、环境和挤乳时间等。目前还无法利用电导率来准确测量牛乳中的体细胞数。
(二)利用牛乳的相对介电常数测定牛乳的体细胞
介电常数又称介质常数,是指电容器极板之间充满某种电介质时,电容增大到的倍数,常用:表示。体细胞受电场影响可能会出现极化状态,当体细胞处于和它形态有关的频率的电场下时,细胞将可能会被极化,细胞内的离子将随着电场震动,使得体细的介电常数明显增大,牛乳巾体细胞数越多,牛乳的介电常数改变越大。通过对比极化前后牛乳的介电常数变化可估算出牛乳中的体细胞数。
(三)利用近红外线检测牛乳的体细胞
牛乳中的体细胞数与蛋白质含量存在较好的相关性。这可能是因为乳腺炎会增加乳房毛细血管的通透性,使得牛乳中的血清蛋白含量增加,同时奶牛在患乳腺炎之后,分泌的血纤维蛋白溶解酶增加,这会分解牛乳中的α-酪蛋白和β-酪蛋白,使得酪蛋白的含量下降。R Tsenkova等人研究发现乳糖与体细胞数之间的相关性也比较好,这可能是因为乳腺炎的牛乳中乳糖含量会下降。由于牛患上乳腺炎后所分泌乳的成分会发生改变,研究乳成分与体细胞数之间的关系,通过近红外测定牛乳中的成分可以判断牛乳中的体细胞数。
(四)利用牛乳pH测定体细胞数
正常牛乳的pH一般为弱酸性,而患有乳腺炎牛产的乳为弱碱性,通过测定牛乳的pH可以达到判定的目的。刘文进等人研究表明,牛乳pH的变化与体细胞的含量呈正相关。牛乳的pH在6.4~6.6时为正常,体细胞低于20×104个/mL;牛乳pH在6.6~6.8时,体细胞为20×104~50×104个/mL;牛乳pH在6.8~7.2时,体细胞为50×104~150×104个/mL;牛乳pH在7.0~7.2时,体细胞为150×104~500×104个/mL;牛乳pH在7.2以上时,体细胞大于500×104个/mL。
(五)利用DNA含量测定休细胞数
体细胞中DNA的含量相对比较确定,通过将体细胞破碎,提取出的DNA含量和体细胞数呈正相关。Sedinova和Urtanova等人通过孔径为2~5um的硝化纤维膜将体细胞从牛乳中分离出来,然后月二苯胺等吲哚试剂进行处理,让体细胞中的DNA释放出来,利用分光光度计测定DNA的量,并用8mg DNA相当于100×104个体细胞的关系把DNA含量换算成体细施数。他们用这种方法测得的结果与标准方法显微镜计数测得结果的相关系数达到了0.997。
(六)利用黏度测定体细胞数
唐平和程文健等人将牛乳样品经表面活性剂十二烷基硫酸钠处理后,牛乳样品中体细胞的细胞膜和核膜被破坏,细胞DNA大量释放,引起牛乳的稠度发生改变,体细胞越多释放的DNA越多,稠度的改变就越大。在一恒定温度条件下,pTI为7.5的缓冲液和处理时间为15~20min时,牛乳样品经SDS处理后,用Lamb-lewis稠度计测量其稠度的变化,发现牛乳样品度与体细胞数之间存在显著的线性关系。
牛乳体细胞数与牛乳品质和奶牛乳腺炎有着密切的关系,检测体细胞数对牧场养殖和乳品加工都有着重要意义。国内外对牛乳体细胞检测已经做了大量研究工作,并提出了许多检测方法和研究思路。随着我国乳品工业的发展,牛乳体细胞检测也将成为一项日常检测项目,牛乳体细胞的检测迫切需要一种快速、准确、低成本的检测方法,这将成为牛乳体细胞检测研究的一个主要方向。
相关链接:牛乳体细胞快速检测方法研究进展(一)
文章来源:《食品快速检测实训教程》
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