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基因分离的主要方法

有关基因的研究转向对基因功能的研究。基因功能研究的目的也就是要回答以下一些问题：①基因本身的结构如何，位置在哪里，拷贝数如何；②基因本身的表达特点如何，是否具有基因表达的组织性和发育阶段的特异性，在整个生物生长发育不同阶段的功能是什么；③该基因的突变、缺失等对生物体可能造成的影响等。可以看出，有关基因的克隆不再是单纯获得一段DNA序列或者cDNA序列的问题，而是对整个基因以及在植物整个生长发育网络中功能与角色的全面认识。

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11-2017

花药培养的操作技术

花药培养是指将花粉发育至一定阶段的花药培养在人工培养基上，诱导其花粉粒改变发育进程，形成花粉胚或愈伤组织，进而分化成苗的过程，属于器官培养的范畴。花粉培养也称为小孢子培养，是指将发育至一定阶段的花粉从花药中分离出来成为分散或游离状态，通过培养使花粉粒脱分化，进而发育成完整植株的过程，属于细胞培养的范畴。

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11-2017

花粉培养的操作技术

有些物种的花蕾经消毒后在无菌条件下取出花药，放在液体或固体培养基上培养，花药会自然开裂，将花粉散落在培养基里(上)，然后将花药壁去除，进行花粉培养。这种方法在油菜和几种禾本科植物里有所应用，但由于效率低，一般不采用。

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11-2017

单倍体植株再生、鉴定以及花粉培养与花药培养的比较

花药培养2～3周后，花药中的小抱子经大量分裂形成胚或愈伤组织，并逐渐使花药壁破裂，表面上看似乎从花药表面形成的突出物。大部分禾谷类植物，如水稻、小麦、大麦、玉米等是通过器官发生途径产生单倍体植株的。单倍体胚萌发成单倍体植株往往需要特定的处理，才能获得较高的萌发率。

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11-2017

影响花药／花粉(小孢子)培养的因素

供体植株的生长条件对培养效果有重要影响，有时只有在控温、一定光周期和光强的环境条件下，其花药才能有反应。不同植物种对环境条件的要求不同，所以没有一个固定的环境控制模式。有些物种供体植株的年龄影响小孢子胚胎发生，多数情况下幼年植株优于老年植株，但甘蓝型油菜却相反。

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11-2017

植物单倍体育种

Tulecke (1950)首次成功地培养了数种裸子植物的成熟花粉粒，发现在一定的培养基上，一些花粉可以不按正常的发育途径发育成成熟花粉，而是形成愈伤组织，但大多数花粉粒还是长出了花粉管而不形成愈伤组织。遗憾的是他在被子植物的试验中失败了。

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11-2017

雌甾酮、雌二醇、雌三醇物化性质和用途

雌甾酮可作合成炔雌酮的中间体。雌酮是卵巢成熟卵泡(主要是泡膜细胞)和黄体分泌的一种雌激素，其作用与雌二醇相同，能促进和调节女性副性器官发育，促使女性副性征出现。雌酮的雌激素活性为雌二醇的十分之一，但比雌三醇强3倍。口服较易失活，故口服剂量约为注射剂量的五倍以上。主要用于子宫发育不全、月经失调、更年期障碍等。雌二醇是体内主要由卵巢成熟滤泡分泌的一种天然雌激素。作用与己烯雌酚相似而较强。它能促使性器官发育，并使子宫内膜增生、脱落，产生周期性月经，可抑制脑垂体前叶分泌促性腺激素与催乳素，并对抗雌激素作用。雌激素类药。用于子宫功能性出血、原发性闭经、绝经期综合征及前列腺癌等。雌三醇是体内雌二醇和雌酮的代谢产物，是主要存在于尿的一种天然激素。口服雌激素活性约为雌酮6倍，肌注则较弱。它对阴道和子宫颈管具有选择性作用，而对子宫实体及子宫内膜无影响。对阴道上皮角化作用比雌二醇强，能促进阴道黏膜血管新生和阴道上皮损伤愈合，同时能增强子宫颈细胞功能，使子宫颈纤维增生，从而增加宫颈部的弹性和柔软性。此外，对下丘脑和腺垂体有反馈性抑制作用，不抑制排卵，仅对黄体功能产生明显影响。

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11-2017

原生质体研究的发展和应用

植物细胞主要由细胞壁、细胞膜、细胞质和细胞核组成。原生质体(protoplast)指采用机械或酶解法去掉了细胞壁的裸露细胞。由于去掉了细胞壁，就使得细胞膜成为细胞活物质与外界环境的唯一屏障。自1971年植物原生质体培养成功以来，对原生质体的研究在植物中不断增多，研究的结果也逐渐显示出它在作物遗传改良中具有较大的应用潜力。

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11-2017

原生质体分离、纯化

原生质体培养的前提之一是获得大量有活力的原生质体，如第一节所述，原生质体分离(价otoplast isolation)方法较多，但现在用得最广的是酶解法，本节主要对酶解法分离原生质体进行介绍。

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11-2017

原生质体培养及植株再生

原生质体的培养方法较多，大多数与细胞培养相似。主要的培养方法有三种，即液体浅层培养法、固体培养法、液固结合培养法，不同学者在上述方法的基础上发展了其他的一些方法，如悬滴培养法、看护培养、饲喂层培养等。

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11-2017