1．方法原理

酚类化合物于pH10.0±0.2介质中，在铁氰化钾存在下，与4-氨基安替比林反应，生成橙红色的吲哚酚安替比林染料，其水溶液在510nm波长处有最大吸收。研究指出：酚类化合物中，羟基对位的取代基可阻止反应进行；但卤素、羧基、磺酸基、羟基和甲氧基除外，这些基团多半是能被取代下的；邻位硝基阻止反应生成，而间位硝基不完全地阻止反应；氨基安替比林与酚的偶合在对位较邻位多见，当对位被烷基、芳基、酯、硝基、苯酰基、亚硝基或醛基取代，而邻位未被取代时，不呈现颜色反应。

2．方法的适用范围

用光程长为20mm比色皿测量时，酚的最低检出浓度为0.lmg/L。

3．仪器

分光光度计。

4．试剂

1)苯酚标准贮备液：称取100g无色苯酚（C6HSOH )溶于水，移入1000m1容量瓶中，稀释至标线。置4℃冰箱内保存，至少稳定一个月。

2)贮备液的标定：

①吸取10.00ml苯酚贮备液于250m1碘量瓶中，加水稀释至100m1，加10.0m1 0.lmol/L溴酸钾一溴化钾溶液，立即加入5m1盐酸，盖好瓶塞，轻轻摇匀，于暗处放置10min。加入1g碘化钾，密塞，再轻轻摇匀，放置暗处5min。用0.0125mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至淡黄色，加入lml淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚好褪去，记录用量。

②同时以水代替苯酚贮备液做空白试验，记录硫代硫酸钠标准溶液用量。

③苯酚贮备液浓度由下式计算：

苯酚（mg/ml)=（V1一V2)C×15.68/V

式中：V1——空白试验中消耗的硫代硫酸钠标准溶液体积（ml);

V2——滴定苯酚贮备液时消耗的硫代硫酸钠标准溶液体积（ml);

V一一一苯酚贮备液体积（ml）;

C一一硫代硫酸钠标准溶液浓度（mo/L) ;

15.68——摩尔质量（1/6C6H5OH) (g/mol)。

3)苯酚标准中间液：取适量苯酚贮备液，用水稀释至每毫升含0.010mg苯酚。使用时当天配制。

4)溴酸钾一溴化钾标准参考溶液C(116 KBrO3)=0.lmol/L：称取2.784g溴酸钾（KBrO3 )溶于水，加入l0g溴化钾（KBr）使溶解，移入1000ml容量瓶中，稀释至标线。

5）碘酸钾标准溶液C(1/6 KIO3)=0.0250mol/L：称取预先经180℃烘干的碘酸钾0.8917g溶于水，移入l 000m1容量瓶中，稀释至标线。

6)硫代硫酸钠标准滴定溶液C (Na2S3O3·5H2O) ≈0.025mmol/L:

①称取6.2g硫代硫酸钠溶于煮沸放冷的水中，加入0.2g碳酸钠，稀释至l000ml，临用前，用碘酸钾溶液标定。

②标定：分取20.00m1碘酸钾溶液置于250ml碘量瓶中，加水稀释至l00m1，加lg碘化钾，再加5ml (1+5)硫酸，加塞，轻轻摇匀。置暗处放置5min，用硫代硫酸钠溶液滴定至淡黄色，加lml淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚褪去为止，记录硫代硫酸钠溶液用量。

③按下式计算硫代硫酸钠溶液浓度（mol/L )

C(Na2S2O3·5H2O)＝0.0250×V4/V3

式中：V3——硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定用量（ml)；

V4——移取碘酸钾标准溶液量（ml);

0.0250一一碘酸钾标准溶液浓度（mol/L)

7) 淀粉溶液：称取lg可溶性淀粉，用少量水调成糊状，加沸水至100m1，冷却后，置冰箱内保存。

8) 缓冲溶液（pH约为10)：称取20g氯化铵(NH4C1)溶于100m1氨水中，加塞，置冰箱中保存。

注：应避免氨挥发所引起pH值的改变，注意在低温下保存和取用后立即加塞盖严，并根据使用情况适量配制。

9) 2%4-氨基安替比林溶液：称取2g 4-氨基安替比林（C11H13N3O )溶于水，稀释至l00ml，置冰箱中保存。可使用一周。

注：固体试剂易潮解、氧化，宜保存在干燥器中。

10) 8％铁氰化钾溶液：称取8g铁氰化钾｛K3[Fe (CN)6]｝溶于水，稀释至100m1,置冰箱内保存，可使用一周。

5．步骤

(1)校准曲线的绘制

于一组八支50ml比色管中，分别加入0、0.50、1.00、3.00、5.00、7.00、10.00、12.50ml酚标准中间液，加水至50ml标线。加0.5m1缓冲溶液，混匀，此时pH值为10.0±0.2,加4-氨基安替比林溶液1.0ml混匀。再加1.0ml铁氰化钾溶液，充分混匀，放置10min后立即于510nm波长，用光程为20mm比色皿，以水为参比，测量吸光度。经空白校正后，绘制吸光度对苯酚含量（mg）的校准曲线。

(2）水样的测定

分取适量的馏出液放入50ml比色管中，稀释至50ml标线。用与绘制校准曲线相同步骤测定吸光度，最后减去空白试验所得吸光度。

(3）空白试验

以水代替水样，经蒸馏后，按水样测定相同步骤进行测定，以其结果作为水样测定的空白校正值。

6．计算

挥发酚（以苯酚计，mg/L）=m/V×1000

式中：m——由水样的校正吸光度，从校准曲线上查得的苯酚含量（mg);

V—－移取馏出液体积（ml)。

注：如水样含挥发酚较高，移取适量水样并加水至250m1进行蒸馏，则在计算时应乘以稀释倍数。

7．精密度和准确度

三个实验室分析含2.0mg/L苯酚的统一标准溶液，实验室内相对标准偏差为0.4%;实验室间相对标准偏差为2%；相对误差为-2%。