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细胞系或细胞株的鉴定与管理

发布时间:2015-11-26 00:00 作者:中国标准物质网 阅读量:1042

(一)对已建立细胞系的鉴定

要求能提供细胞的一般和特殊的生物学性状指标。一般特性指标包括:细胞的一般形态、特异性结构、细胞生长曲线和分裂指数、倍增时间、接种率、染色体分析、同工醉检查、DNA指纹图谱等。

1.对正常细胞系的鉴定

对正常细胞系的鉴定主要围绕以下4个方面进行:①鉴定细胞的种系来源:常用方法主要有染色体分析、同工酶分析、DNA指纹图谱等技术;②鉴定细胞的组织来源:可通过形态学手段、检测组织特异性抗原等进行鉴定;③细胞是否发生转化和恶变:主要通过核型分析、细胞生长行为观察(是否丧失接触抑制)、裸鼠成瘤实验等进行鉴定;④细胞有无发生交叉污染,主要通过同工醉及DNA指纹图谱技术进行鉴定。

2.对肿瘤细饱系的鉴定

对肿瘤细胞系的鉴定主要围绕其恶型性展开,染色体的异常、接触抑制和密度依赖生长特性的改变、集落形成能力、裸鼠成瘤、动物体内的侵袭生长,以及某些基因、分子水平的特征均是肿瘤细胞鉴定的方向。

(二)已建立细胞系的管理

对已建立的和经过鉴定的细胞系,一般除保留在建立者的实验室外,为了科研交流的方便和保证细胞系的稳定性,国际上通行的惯例是将其保存在细胞库中。
在国际上,美、英和日本等国已建有细胞库。其中,美国的ATCC(AmericanTypeCultureCollection,ATCC)作为美国国立癌症研究所(NCI)和美国卫生研究所(NIH)中的细胞资源库,是世界卫生组织(WHO)的国际培养细胞文献中心。同时,ATCC不仅是美国也是世界上最大的细胞库,现存细胞系超过数千种。ATCC接纳来自世界各国已经鉴定的细胞予以贮存,同时也向世界各国的研究者或实验室免费提供研究用细胞。

ATCC接纳入库细胞时,必须符合其入库标准。ATCC入库细胞时所要求的基本检测项目主要有:①培养简历,包括组织来源日期、物种、组织起源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态、细胞已传代数等;②冻存液的组成;③细胞活力,包括融解前后细胞接种存活率和生长特性;④培养液,说明培养基的名称(一般要求不含抗生素)、血清来源和含量;⑤细胞形态;⑥核型,指二倍体或多倍体、有无标记染色体;⑦无微生物污染检测,包括细菌、真菌、支原体、原虫和病毒等;⑧物种检测,要求检测同工酶,主要为G6-PD(6-磷酸葡萄糖脱氢酶)和LDH(乳酸脱氢酶),以证明细胞有否交叉污染以及反转录酶检测;⑨免疫检测,提交1-2种血清学检测;⑩细胞建立者相关信息,包括建立者、检测者姓名等。

此外,对于已建立的各种细胞系或细胞株习惯上都给以名称。细胞的命名无严格统一规定,大多采用有一定意义的缩写词或代号表示。以下列举几种代表性的细胞名称以供参考。如HeLa为供体患者的姓名缩写;CHO为中国地鼠卵巢细胞(Chinesehamsterovary)英文单词的首字母缩写;宫-743为1974年3月建立的宫颈癌上皮细胞;NIH3T3为美国国立卫生研究所(NIH)建立,每3天传代,每次接种密度为3×105/ml。

除美国的ATCC(www.atcc.org)之外,欧洲细胞培养物收藏中心(ECACC)也是重要的细胞库,建立于1984年,其网址为www.ecacc.org.Uk

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