色谱柱是HPLC系统的心脏。稳定的、高性能的色谱柱是建立耐用、重现的方法的基础。不同的柱在理论板数、峰对称性、保留、分离度和寿命等方面可能不同。填料的特性决定色谱柱的性能。填料颗粒小，颗粒均匀，球形规则，有利于提高柱效。掌握了各种填料的种类、对样品的吸附或分配特点有助于合理地选择不同类型的色谱柱，达到分离和分析的目的。

HPLC柱多数填料是由硅胶颗粒制备的。以硅胶为基质健合有机表面层，如C18、C8等用得最多，尤其是LC/ESIMS，常用反相色谱法。在HPLC中应用的有三种填料颗粒类型：全多孔微粒、微表膜颗粒和灌流颗粒。现在，全多孔微球用得最多，因其性能较好，如柱效、样品载量、柱寿命。

硅胶颗粒有多种规格，如颗粒度、孔度、表面积、球形或无定形和高纯度等，以适用于各种应用。现在，HPLC分析中，常使用粒度dp为5-10μm的固定相，色谱柱长10-25cm,Δp为3-10MPa，就可获得n≥3000的柱效，使用大多数有机溶剂或水作流动相，可在2-30min内，实现大多数不同组成样品的分析要求。更小的颗粒如3.5μm、2.5μm、1.7μm用于高效、快速分析。2004年美国Waters公司在匹茨堡会议上展出了最新研制的ACQUITY超高效液相色谱(ultraperformanceliquidchromatography,UPLC)，它使用dp仅为1.7μm的新型固定相，色谱仪提供的△p达140MPa(20000psi)，可使在常规高效液相色谱需要30min时间的样品分析在超高效液相色谱缩短为仅需5min，并呈现出色谱柱柱效达20万块／米理论塔板数的超高柱效。

UPLC保持了HPLC的基本原理，全面提升了液相色谱的分离效能，不仅提高了分辨率，也使检测灵敏度和分析速度大大提高，使液相色谱在更高水平上实现了突破。因此，必将大大拓宽液相色谱的应用范围，并大大加强了UPLC在分离科学中的重要地位。