①为什么选择30-300菌落范围的平板计数呢？有人按公式“误差²＝稀释误差²＋菌落分布误差²”进行计算，结果发现菌落数越少，误差越大。平板上菌落在20以下．误差更大。菌落数在300以上时，由于菌落密度太大，又不易辨认。有人证明在80-300误差最小。

②菌落分布的误差来源有二：样品菌相中细菌的拮抗、互生等相互作用造成不同稀释度之间菌落分布误差；样品稀释液的不均匀造成同一稀释度的两个平行平板间的误差。据测定，样品不均带来的误差在10倍以内，而微生物菌相之间的相互作用带来的误差在1.2个数量级。消除微生物相互作用带来的误差最好的办法是最大的稀释，但过多的稀释又可以带来稀释误差。因此，选择合适的稀释度非常重要。

菌落总数测定的误差与多种因素有关，用公式表示为：误差＝菌落计数误差＋菌落分布误差＋吸管容积误差＋稀释操作误差。

③操作中必须有“无菌操作”的概念。检验中所用的各种玻璃器皿等，用前要洗净灭菌；为了防止检样中微生物在稀释过程中损伤、致死或被污染，检样稀释液最好用磷酸缓冲盐水（PBS)或0.1％蛋白胨水并设置空白稀释液对照。操作环境要清洁，环境琼脂平板在工作台暴露15min，每个平板不得超过15个菌落。

④样品称量要准确，并均质化。实验结果表明，均质机不同，对菌落计数结果不同。另外，吸管的使用要准确：首先吸取的样液的量与吸管体积一致，不要用lOmL的吸管移取1mL的校注液。因为吸管越大，吸取1mL的量的误差越大。其次要注意吸管上是否表明吹或不吹，然后正确操作。

⑤稀释时不要产生气泡在做10倍递增稀释中，吸管插人检样稀释液内不能低于液面2.5cm；吸人液体时，应先高于吸管刻度，然后提起吸管使尖端离开液面，将尖端贴于玻璃瓶或试管内壁，使吸管内液调至要求刻度，在吸管从稀释液内取出时，不会有多余的液体黏附在管外。移人新稀释液时，应将吸管内液体沿管壁流人，勿使吸管尖端伸人稀释液内，以免吸管外部豁附的检液溶于其内，每一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释度应更换一支吸管。

⑥为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转，检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过20min，以防止细菌有所死亡或繁殖。为了了解操作过程中有无受到来自空气的污染，在取样进行检验的同时，于工作台上打开一块琼脂平板，其暴露的时间应与该检样从制备、稀释到加入平皿时所暴露的最长时间相当，然后与加有检样的平皿一并置于温箱内培养。

⑦检样稀释液（特别是10-‘的稀释液）有时带有食品颗粒，为了避免与细菌菌落发生混淆，可做一检样稀释液与琼脂混合的平皿，不经培养，而于4℃环境中放置，以便在计数检样菌落时用作对照。

⑧进行菌落计数时，应先分别观察同一稀释度的两个平皿和不同稀释度的几个平血内平板上菌落生长情况。平行实验的两个平板菌落数应该接近，不同几个稀释度的几个平板上菌落数则应与检样稀释倍数成反比，即检样稀释倍数越大，菌落数越低，稀释倍数越小，菌落数越高。