20世纪50年代，纸色谱在有机及生物学领域中曾是分离和鉴定微量物质的一种重要手段，自从出现薄层色谱之后，其应用范围有所缩小，但用于鉴定亲水性较强的化合物时，它的分离效果比薄层色谱好。因此，两者可以相互配合应用。

纸色谱是分配色谱的一种。样品溶液点在滤纸上，通过层析而相互分开。在这里滤纸仅是惰性载体；吸附在滤纸上的水作为固定相，而含有一定比例水的有机溶剂（通常称为展开剂）为流动相。展开时，被层析样品内的各组分由于它们在两相中的分配系数不同而可达到分离的目的。所以，纸色谱是液--液分配色谱。

纸色谱的优点是操作简便、便宜，所得色谱图可以长期保存。其缺点是展开时间较长，一般需要几小时，因为溶剂上升的速度随着高度增加而减慢。

纸色谱所用的滤纸与普通滤纸不同，两面要比较均匀，不含杂质。通常作定性试验时可采用国产1号层析滤纸。大小可根据需要自由选择。一般上行法所用滤纸的长度约为10-15cm，宽度视样品个数而定。

（1）点样

先将样品溶于适当的溶剂中（如乙醇、丙酮、水等），再用毛细管吸取试样点在事先已用铅笔画好的离纸底边2一3cm处的起始线上，样点的直径为0.1一0.3cm，两个样点间隔为1cm。如果样品溶液过稀，可以在样点干燥后重复点样，必要时可反复数次。点好样之后，将滤纸放入已置有展开剂的密闭槽中（图2.32)，纸的下端浸入液面下0.5cm左右。展开剂借毛细管作用沿纸条逐渐上升。待溶剂前沿接近纸上端时，将纸条取出，记下前沿位置，晾干。

(2）展开剂

选用展开剂要根据被分离物质的极性而定。如试样与展开剂的极性相差甚远，则不可能得到良好的分离效果；这时被分离物质或是紧跟前沿移动，或是留在原点不动。实验时，一般可参考前人试验的结果选用。

展开剂往往不是单一的溶剂，如丁醇：醋酸：水=4:1:5，指的是将三种溶剂按体积比先在分液漏斗中充分混合，静置分层后再取上层丁醇溶液作为展开剂用。

(3）显色

被分离物质如果是有色组分，展开后滤纸上即呈现有色斑点。如果化合物本身无色，则可在紫外灯下观察有无荧光斑点；或是用碘蒸气熏的方法来显色。将纸条放入装有少量碘的密闭容器中，许多有机化合物都能和碘形成棕色斑点。但当色谱纸取出之后，在空气中碘逐渐挥发，纸上的棕色斑点就消失了。所以显色之后，要立即用铅笔将斑点位置画出。此外，还可以根据化合物的特性采用试剂进行喷雾显色，如芳族伯胺可与二甲氨基苯甲醛生成黄--红色的希夫（schiff)碱，羧酸可用酸碱指示剂显色等。

比移值（R_f值）：比移值是表示色谱图上斑点位置的一个数值（图2.33)。它可以按下式计算式中

a—溶质的最高浓度中心至样点中心的距离；

b溶剂前沿至样点中心的距离。

要实现良好的分离，R_f值应在0.15一0.75之间，否则应该调换展开剂重新展开。

影响比移值的因素很多，如温度、滤纸和展开剂等。因此，它虽然是每个化合物的特性常数，但由于实验条件的改变而不易重复。所以在鉴定一个具体化合物时，经常采用已知标准试样在同样实验条件下作对比实验。

纸色谱的展开方法除上行法之外，还有下行法、径向法、双向层析法等，但其使用范围都不太广泛。